生物大分子物质的制备.ppt

2电化学法有些反应过程会放出质子氢(H+)，可用灵敏的pH计或NaOH溶液滴定等方法追踪其变化，从而计算出欲测物的含量或活力。例如：葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，用NaOH溶液滴定该酸的含量，便可求出葡萄糖氧化酶的活力。第23页，共61页，星期日，2025年，2月5日3生物活性检测法大多数生命物质，尤其是一些激素类物质，当把它们注射入动物的特定器官时，所属机体将发生相应的变化，并且二者间有一定的相关性。根据这一性质设计的方法，即可对生命活性物质进行检测。如：在某个动物器官中注射某种激素，使器官细胞加速分裂，通过检测细胞的数量变化来推测激素的生物活性。第24页，共61页，星期日，2025年，2月5日4免疫分析法采用抗体与抗原之间发生的特异反应，并结合放射性同位素标记或酶标记，就可对有关物质进行灵敏的定性或(和)定量分析(详见第十九章)。5生物传感器用生物传感器中的敏感膜（具有分子识别功能的生物活性材料如酶、蛋白、抗体、生物膜和微生物等作为敏感元件）与待测溶液中的某一物质进行反应，即可通过显示器反映出有效成分的数量(详见第十七章)。第25页，共61页，星期日，2025年，2月5日第三节细胞的破碎细胞是生物体结构和功能的基本单位。有效成分可以分泌于细胞外，也有存在于细胞内的。如淀粉酶和蛋白酶等就是分泌在胞外的培养液中，用适当的溶剂可直接提取。存在于细胞内的酶又有游离酶和结合酶之分，前者游离在细胞质中，后者则与细胞器紧密结合(如氧化还原酶和有机磷水解酶等)。第26页，共61页，星期日，2025年，2月5日欲提取存在于细胞内的物质时，必须把细胞破碎（个别的则例外如采用Mg2+溶液提取酶蛋白）。动物脏器的细胞膜比较脆弱，极易破损，往往在组织绞碎或提取时就被破坏了。植物和微生物的细胞壁较牢固，需要在提取前进行专门的破细胞操作。第27页，共61页，星期日，2025年，2月5日一、机械破碎1研磨法剪碎的动物组织置研钵中，用研磨棒研碎。用匀浆器处理，也能把动物细胞破碎。大规模生产时，可用电动研磨法。细菌和组织的细胞破碎均可用此法。2组织捣碎器法这是一种剧烈的破碎细胞方法。捣碎器(8000~10000r/min)处理30~45s，植物和动物细胞能完全破碎。第28页，共61页，星期日，2025年，2月5日3超声波法它是借助声波的振动力破碎细胞壁和细胞器的有效方法。4压榨法此法是一种温和、彻底破碎细胞的方法。用1.77×108～3.54×108Pa的压力迫使几十毫升细胞悬液通过一个小孔(细胞直径的孔)，致使其被挤破、压碎。5冻融法将细胞置低温下冰冻一定时间，然后取出置室温下(或40℃左右)迅速融化。如此反复冻融多次，细胞可在形成冰粒和增高剩余胞液盐浓度的同时，发生溶胀、破碎。第29页，共61页，星期日，2025年，2月5日二、溶胀和自溶1溶胀细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液如低浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，引起细胞膜发生胀破的现象称溶胀。2自溶细胞结构在本身所具有的各种水解酶(如蛋白酶和酯酶等)作用下，发生溶解的现象称自溶。第30页，共61页，星期日，2025年，2月5日三、化学处理脂溶性的溶剂可把细胞壁、细胞膜的结构部分溶解四、生物酶降解生物酶(如溶菌酶)有降解细菌细胞壁的功能。在用此法处理细菌细胞时，先是细胞壁消解，随之而来的是因渗透压差引起的细胞膜破裂，最后导致细胞完全破碎。第31页，共61页，星期日，2025年，2月5日第四节抽提一、抽提的含义抽提通常是指用适当的溶剂和方法，从原料中把有效成分分离出来的过程。经过处理和破细胞原材料中的有效成分可用缓冲液、稀酸、稀碱、或有机溶剂(如丙酮、乙醇)等抽提；还可用蒸馏水抽提。第32页，共61页，星期日，2025年，2月5日一般理想的抽提溶液应具备下述条件：对有效成分溶解度大，破坏作用小；对杂质不溶解或溶解度很小；来源广泛、价格低廉、操作安全等。第33页，共61页，星期日，2025年，2月5日二、抽提有效成分的影响因子抽提时pH值、金属离子、溶剂的浓度、极性等因子，可明显影响有效成分的性质和数量。第34页，共61页，星期日，2025年，2月5日1pH值对蛋白质或酶等具有等电点的两性电解质物质，一般选择抽提液的