DB4115T 078-2020 息半夏组织培养及育苗技术规程.docxVIP

ICS65.020.01CCSB05

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信阳市地方标准DB4115/T078—2020

息半夏组织培养及育苗技术规程

2020-12-30发布2021-03-30实施

信阳市市场监督管理局发布

I

DB4115/T078—2020

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由息县工业和信息化局提出。

本文件由息县工业和信息化局归口。

本文件起草单位：河南息半夏药业有限公司、信阳农林学院、河南省野生药材综合开发利用工程技术研究中心、息县市场监督管理局。

本文件主要起草人：李金平、陈琼、刘振华、王金合、杨俊杰、李丹、赵斌、李晓斌。

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DB4115/T078—2020

息半夏组织培养及育苗技术规程

1范围

本标准规定了息半夏组织培养的生产技术流程和炼苗移栽操作规范。本标准适用于信阳市行政区域内息半夏组织培养及育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB317白砂糖

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB5749生活饮用水卫生标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T22278良好实验室规范原则HG/T3491化学试剂活性炭

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

植物组织培养

指利用植物体的器官、组织细胞或原生质体作为外植体，采用无菌操作接种于人工配制的培养基上，在一定的光照和温度条件下进行培养，使之生长、分化并发育成完整小植株的技术。

3.2

外植体

植物组织培养所用的材料。

3.3

培养基

由水、无机盐类、有机物质、蔗糖、植物生长调节剂及琼脂等组成的培养基质。

3.4

组培苗

利用优良息半夏品种的块茎、叶片、叶柄作为外植体，采用植物组织培养技术，培养再生出来的试管苗。

3.5

褐化

褐化是由于组织中的多酚氧化酶在氧气的参与下，使酚类物质被氧化后产生褐色醌类物质。

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3.6

玻璃化

“试管苗玻璃化”是指在进行植物组织培养中，试管苗生长异常，叶、嫩梢呈透明或半透明的水浸状，芽苗矮小肿胀失绿，叶片皱缩成纵向卷伸，脆弱易碎。这些试管苗在培养过程中发生了一种生理失调或生理病变，表现出分化能力低，难以增殖成芽，也难以生根成苗。

3.7

增殖培养

把外植体初次培养(即初代培养)获得的培养物转移到新鲜的培养基中，如此反复多次进行培养，从而使培养物得以成倍增殖的过程。

3.8

培养代数

同一外植体，经继代培养的次数。

4息半夏组织培养技术流程

4.1实验室要求

息半夏组织培养实验室包括：药品室、洗涤室、准备室、接种室、培养室、档案室，同时配备调温设施。

实验室应符合GB19489和GB/T22278的要求。4.2培养基及其配制

4.2.1母液的配制和保存

将常用药品配制成比所需浓度高50～100倍的母液，药品配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行分析实验室用水规格和试验方法标准（所用水应符合GB/T6682三级水的要求）。

称量不同的药品使用不同的汤匙，避免药品的交叉污染与混杂。

息半夏组织培养以MS培养基为基本培养基，所用化学试剂应符合国家有关标准规定。

配制好的母液分别贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期。母液贮藏温度2℃~10℃,贮藏时间≦3个月，如有霉菌和沉淀产生，则不得使用。

4.2.2不溶于水药品的溶解方法

2，4-D、NAA等不溶于水的药品先用少量95%乙醇溶解，然后加水定容。

6-BA先溶于少量0.1mol/L的盐酸中，再加水定容。所用水应符合GB/T6682三级水的要求。

4.2.3培养基配制

4.2.3.1基本培养基

由药品、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水，应分别符合GB317和GB5749规定。所需蔗糖的浓度是20g/L，琼脂粉的浓度是5.5g/L。

成苗培养阶段，加入0.25%符合HG/T3491规定的活性炭，减少组织培养的褐化和玻璃化，同时有利于息半夏壮苗。培养基的配制程序如下：

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4.2.3.2诱导培养基配制

配方为MS+2,4-D（0