DB32T 2260-2012 甘蓝品种纯度及真实性 SSR 分子检测方法.pdfVIP

ICS65.020.20

B31

备案号：37037-2013DB32

江苏省地方标准

DB32/T2260-2012

甘蓝品种纯度及真实性SSR分子检测方法

SSR-basedMethodtoAssayPurityandGenuinenessinCabbage

(BrassicaoleraceaL.var.capitataL.)

2012-12-28发布2013-02-28实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T2260-2012

前言

本标准按照GB∕T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。

本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。

本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准由江苏省农业科学院负责起草。

本标准主要起草人：曾爱松、严继勇、宋立晓、高兵。

DB32/T2260-2012

甘蓝品种纯度及真实性SSR分子检测方法

1范围

本标准依据SSR分子标记原理，规定了进行甘蓝杂交种和亲本自交系的品种纯度及真实性检测方

法的仪器设备及试剂、引物筛选、试验步骤、纯度检测和真实性鉴定。

本标准适用于甘蓝杂交种及亲本自交系的纯度及真实性检测。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1

品种纯度varietalpurity

品种在DNA分子标记带型方面典型一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占样品种子总数的

百分率表示。

2.2

品种真实性varietalgenuineness

供检品种与标准品种在DNA分子标记带型方面的符合程度。

2.3

SSR分子标记simplesequencerepeatmarker

由寡核苷酸为单位的简单串联重复序列。

2.4

引物primer

结合在模板DNA上的互补短链，提供3＇-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板DNA的互

补链。

3原理

在甘蓝基因组中普遍存在着由寡核苷酸为基本单位的简单串联重复序列，品种间因其重复次数不同

而存在多态性，据此可以利用适宜引物进行PCR扩增，从而检测出特定SSR位点的多态性，以鉴别品

种的纯度及真实性。

4仪器设备及试剂

4.1仪器设备

PCR扩增仪；DNA序列分析电泳槽；高压电泳仪（3000V，400mA，400W）；电子天平（感量0.01g，

0.001g）；冰箱；微量加样器（0.5μL～10μL，20μL～200μL，100μL～1000μL）；磁力搅拌器；胶

片观察灯；水平摇床；高压灭菌锅；酸度计等。

1

DB32/T2260-2012

烧杯；镊子；刻刀；量筒；容量瓶（500mL，1000mL）；离心管（0.5mL，1.5mL）；吸头(10μL，

200μL，1000μL)；注射器（100mL）；96孔深孔板；96孔PCR板；封板膜；一次性手套；离心管架；

染色盒（55cm×38cm×8cm）；水平仪；夹子等。

4.2试剂

乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；盐酸（HCl，36%）；氢氧化钠(NaOH)；

10倍PCR缓冲液（不含Mg2+），保存条件为-20℃;氯化镁（MgCl2）；四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs），

保存条件为-20℃;TaqDNA聚合酶（5U/μL），保