黄酮类化合物 (2).ppt

（一）柱色谱法1．硅胶柱色谱适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类常用的分离方法有柱层析法、萃取法、铅盐法、HPLC法、薄层层析法等。常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。第55页，共99页，星期日，2025年，2月5日?（1）分离对象：酚、醌、硝基化合物2．聚酰胺柱色谱（2）原理：氢键吸附第56页，共99页，星期日，2025年，2月5日（3）影响因素：黄酮类分子中羟基的数目与位置溶剂与黄酮类溶剂与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小（4）洗脱规律（先→后顺序）叁糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元①苷元相同：第57页，共99页，星期日，2025年，2月5日③-OH位置：C=O邻位-OH黄酮＞C=O对位（或间位）-OH黄酮②-OH多少：酚羟基少＞羟基多＞第58页，共99页，星期日，2025年，2月5日④黄酮类型：异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇第59页，共99页，星期日，2025年，2月5日⑤芳香程度：芳香程度高，共轭双键多吸附力＞芳香程度高，共轭双键少二氢黄酮＞查耳酮⑥溶剂影响：＞第60页，共99页，星期日，2025年，2月5日聚酰胺的双重色谱性以含水移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，苷比苷元先洗下来。以有机溶剂作洗脱剂（如氯仿一甲醇）苷元比苷先洗脱下来。第61页，共99页，星期日，2025年，2月5日极性移动相（含水溶剂系统）洗脱时有机溶剂（如氯仿一甲醇）洗脱时聚酰胺—非极性固定相极性固定相色谱行为类似反相分配色谱正相分配色谱苷极性＞苷元苷元极性＜苷苷先洗脱苷元易洗脱第62页，共99页，星期日，2025年，2月5日习题：下列黄酮化合物，

（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序第63页，共99页，星期日，2025年，2月5日3．葡聚糖凝胶柱色谱分离黄酮类化合物的机理：双重性分离黄酮苷元——靠吸附作用羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。分离黄酮苷时——分子筛性质起主导作用糖数量多，分子量大，先洗脱下来。常用型号：Sephadex-G，Sephadex-LH20第64页，共99页，星期日，2025年，2月5日（二）梯度pH萃取法——酸性不同的黄酮苷元的分离酸性：7,4’-OH＞7-或4’-OH＞一般Ar-OH＞5-OH5%NaHCO35%Na2CO20.2%NaOH4%NaOH溶解的碱水第65页，共99页，星期日，2025年，2月5日（三）根据分子中某些特定官能团进行分离H3BO3络合反应（邻二酚羟基）2.Pb(Ac)2沉淀反应（邻二酚羟基）3.碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮）注意脱铅第66页，共99页，星期日，2025年，2月5日AR1=R2=HBR1=H,R2=RhaCR1=Glc,R2=HDR1=Glc,R2=Rha(1)试比较四种化合物的酸性，(2)比较极性大小(3)比较它们的Rf值大小顺序：硅胶TLC聚酰胺TLC习题：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下：第67页，共99页，星期日，2025年，2月5日第四节黄酮类化合物的检识与结构测定测定一般步骤：（1）化学反应—（2）PC、TLC—（3）UV光谱—（4）1H-NMR（5）MS（6）13C-NMR第68页，共99页，星期日，2025年，2月5日一化学反应——确定化合物的类别二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用——确定黄酮的种类与数量（一）纸色谱（PC）——分离黄酮类化合物及其苷的混合物1．原理—分配色谱第69页，共99页，星期日，2025年，2月5日2．溶剂选择：黄酮苷元—酸性醇溶剂花色苷元—酸性水溶剂HCl或HOAc苷类—双向展开第一向展开剂：采用醇性溶剂第二向展开剂：采用水或水溶液如：n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5上层）如：2%～6%HOAc等第70页，共99页，星期日，2025年，2月5日综上原因，各种黄酮类化合物颜色深浅排列顺序如下