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临床基因扩增检验实验PCR培训班考试题卷

一、选择题（每题2分，共20分）

1.PCR技术的全称是什么？

A.多聚酶链式反应

B.聚合酶链式反应

C.多聚酶链反应

D.聚合酶链反应

答案：B

解析：PCR的全称是聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）。

2.PCR反应中常用的DNA聚合酶是？

A.Taq酶

B.Klenow酶

C.DNA聚合酶I

D.RNA聚合酶

答案：A

解析：Taq酶是从嗜热细菌中提取的，能够在高温下稳定工作，是PCR反应中最常用的DNA聚合酶。

3.PCR反应的三个主要步骤是？

A.变性、退火、延伸

B.变性、复性、延伸

C.变性、退火、复性

D.复性、退火、延伸

答案：A

解析：PCR反应的三个主要步骤是变性（DNA双链解开）、退火（引物与模板结合）、延伸（DNA聚合酶合成新链）。

4.PCR引物的设计原则中，引物的长度一般建议为？

A.1015个碱基

B.1520个碱基

C.2025个碱基

D.2530个碱基

答案：B

解析：PCR引物的长度一般建议为1520个碱基，这样既能保证特异性，又能保证退火温度适中。

5.下列哪种物质不是PCR反应的必需成分？

A.模板DNA

B.引物

C.dNTPs

D.ATP

答案：D

解析：PCR反应的必需成分包括模板DNA、引物、dNTPs（脱氧核苷三磷酸）和DNA聚合酶，而ATP不是必需的。

二、填空题（每空1分，共10分）

1.PCR反应中，变性步骤的温度一般为______℃。

答案：9498

解析：PCR反应中，变性步骤的温度一般为9498℃，目的是使DNA双链解开。

2.PCR引物的退火温度一般比引物的Tm值低______℃。

答案：510

解析：PCR引物的退火温度一般比引物的Tm值（熔解温度）低510℃，以确保引物与模板有效结合。

3.PCR反应中，延伸步骤的温度一般为______℃。

答案：72

解析：PCR反应中，延伸步骤的温度一般为72℃，这是Taq酶的最适工作温度。

4.PCR产物可以通过______电泳进行检测。

答案：琼脂糖凝胶

解析：PCR产物通常通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，以确定产物的存在和大小。

5.在PCR反应中，防止非特异性扩增的措施包括优化______和______。

答案：引物设计、退火温度

解析：优化引物设计和退火温度是防止非特异性扩增的重要措施。

三、判断题（每题2分，共10分）

1.PCR反应中，模板DNA的量越多，扩增效果越好。（）

答案：×

解析：模板DNA的量过多反而可能导致非特异性扩增，适量即可。

2.PCR反应中，引物的浓度越高，扩增效果越好。（）

答案：×

解析：引物浓度过高会导致非特异性扩增和引物二聚体的形成，适量即可。

3.PCR反应中，dNTPs的浓度越高，扩增效果越好。（）

答案：×

解析：dNTPs浓度过高会抑制DNA聚合酶的活性，适量即可。

4.PCR反应中，镁离子的浓度对扩增效果没有影响。（）

答案：×

解析：镁离子是DNA聚合酶的辅助因子，其浓度对扩增效果有重要影响。

5.PCR反应中，循环次数越多，扩增效果越好。（）

答案：×

解析：循环次数过多会导致非特异性扩增和产物降解，一般2535个循环即可。

四、解答题（每题10分，共20分）

1.简述PCR技术的原理及其在临床基因扩增检验中的应用。

答案：

原理：PCR技术是一种体外扩增特定DNA片段的方法，通过变性、退火和延伸三个步骤的循环，使特定的DNA片段呈指数级扩增。

变性：高温使DNA双链解开成单链。

退火：温度降低，引物与模板DNA单链特异性结合。

延伸：DNA聚合酶从引物起始，合成新的DNA链。

应用：

病原体检测：如病毒、细菌的基因检测。

遗传病诊断：如单基因遗传病的基因突变检测。

肿瘤基因检测：如癌基因和抑癌基因的突变检测。

个体识别：如法医学中的DNA指纹分析。

2.设计一个用于检测某特定基因突变的PCR实验方案，包括引物设计、反应体系、反应条件等。

答案：

引物设计：

根据突变位点设计特异性引物，确保引物能够特异性结合突变