生化药物制造工艺酶类药物.pptVIP

三、重要酶类药物的制备（一）药用酶类的概述现在国内外已广泛应用于多种疾病的治疗，其制剂品种已超过700余种。1、与治疗胃肠道疾病有关的酶类药物利用酶作为消化促进剂，早已为人们所采用。2、消炎酶类3、与纤维蛋白溶解作用有关的酶类4、抗肿瘤的酶5、其它药用酶胃蛋白酶广泛存在于哺乳类动物的胃液中，药用胃蛋白酶系从猪、牛、羊等家畜的胃粘膜中提取。1、胃蛋白酶（Pepsin，EC3.4.4.1）01药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶、组织蛋白酶、胶原酶等，为粗制的酶制剂。水溶液呈酸性，难溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。pI为pH1.0，最适pH1.5～2.0。可溶于70％乙醇和pH4的20％乙醇中。胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物。（1）组成（结构）、性质02生产工艺工艺路线：胃蛋白酶原盐酸催化激活成胃蛋白酶。常用的脱脂剂有乙醚、氯仿、四氯化碳。工艺过程：胃膜素和胃蛋白酶联产工艺：向经消化、提取、脱脂、分层、浓缩及60％丙酮沉淀分离胃膜素的母液中，边搅拌边加冷丙酮，至比重为0.91，即有淡黄色胃蛋白酶沉出，静放过夜，去上清液，沉淀真空干燥，即得胃蛋白酶。结晶胃蛋白酶的制备：药用胃蛋白酶原粉，溶于20％酒精中，加H2SO4调pH3.0，5℃静置20h后过滤，加硫酸镁至饱和，进行盐析。盐析物再在pH3.8～4.0的乙醇中溶解，过滤，滤液用硫酸调pH至1.8～2.0，即析出针状胃蛋白酶。沉淀再溶于20%pH4的乙醇中，过滤，滤液用硫酸调pH至1.8，在20℃放置，可得板状或针状结晶。010302第四节酶类药物类药物的原料来源原料选择料应注意以下几点：不同酶的原料选择。注意不同生长发育情况及营养状况：微生物制酶，故需测其活力来决定取酶阶段。要考虑动物年龄及饲养条件等因素；从原料来源是否丰富考虑；从简化提纯步骤着手。如用动物组织作原料，则此动物宰杀后应立即取材。1从动物或植物中提取酶受到原料的限制。2用微生物发酵法生产药用酶，不受季节、气候和地域的限制，生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。3微生物酶制剂高产菌株的选育菌种是工业发酵生产酶制剂的重要条件。目前，优良菌种的获得有三条途径：是从自然界分离筛选；是用物理或化学方法处理、诱变；是用基因重组与细胞融合技术。微生物的分离筛选是一切工作的基础。微生物酶制剂生产的发酵技术有了优良的生产菌株，只是酶生产的先决条件，要有效地进行生产还必须探索菌株产酶的最适培养条件。首先要合理选择培养方法、培养基、培养温度、pH和通气量等。在工业生产中还要摸索一系列工程和工艺条件，如培养基的灭菌方式、种子培养条件、发酵罐的型式、通气条件、搅拌速度、温度和pH调节控制等。还要研究酶的分离提纯技术和制备工艺，这些条件的综合结果将决定酶生产本身的经济效益。生物材料的预处理二、酶类药物的提取和纯化01动物材料的预处理机械处理用绞肉机绞，一般细胞并不破碎，而有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取，因此须采用特殊的匀浆才行。一般应避免剧烈处理，但如是结合酶，则必须进行剧烈处理。020102工业上可用高压匀浆泵。在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。（2）反复冻融（3）丙酮粉组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中，真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低温下可保存数年。2、微生物的预处理要是酶是胞外酶，则可除去菌体后再直接从发酵液中吸附提取酶。但对胞内酶则需将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再行提取。（1）干燥法干燥方法很多，常见有空气干燥、真空干燥和冷冻干燥三种。（2）机械法常用的方法有研磨法，组织匀浆法，超声波法，高压匀浆法等。（3）酶法处理用得最多的是溶菌酶，也有用脱氧核糖核酸酶处理，操作与溶菌酶同。提取方法主要有水溶液法，有机溶剂法和表面活性剂法三种。一般在提取前，应通过调查研究，文献检索，详细了解欲提取酶的性质。（二）酶的提取水溶液法常用稀盐溶液或缓冲液提取。为了防止提取过程中酶活力降低，一般在低温下操作。2、有机溶剂法某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合，用水溶液很难提取，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶变性。最常用的有机溶剂是丁醇。丁醇具有下述性能：亲脂性强，特别是亲磷脂的能力；兼具亲水性，在0℃在水中的溶解度为10.5％；在脂与水分子间能起类似去垢剂