【高效备课】高二生物下册人教2019版选择性必修3同步优选：3.2 基因工程的基本操作程序（第2课时）（课件）.pptx

第3章基因工程第2节基因工程的基本操作程序-2

基因工程的一般操作程序主要包括四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。1.目的基因的筛选与获取4.目的基因的检测与鉴定2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序

转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。基因工程中不同生物转化方法不同。受体细胞将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法花粉管通道法——显微注射法——Ca2+处理法1.转化2.转化的受体细胞03将目的基因导入受体细胞

花粉外源DNA花粉管子房胚珠导入植物细胞（植物细胞转化方法）：花粉通道法花粉管03将目的基因导入受体细胞

农杆菌转化法Ti质粒T-DNA目的基因构建表达载体含目的基因的Ti质粒转入农杆菌含重组Ti质粒的农杆菌导入植物细胞表现新性状的植物植物细胞染色体DNA植物叶片切下与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，或将花序培养在农杆菌溶液中，获得种子，然后筛选、鉴定03将目的基因导入受体细胞

导入动物细胞（动物细胞转化方法）：常用显微注射法将目的基因注入受精卵导入细菌（细菌转化方法）一般用Ca2+处理使大肠杆菌处于一种易于吸收周围环境中DNA分子的生理状态（感受态），然后将重组的基因表达载体导入其中。03将目的基因导入受体细胞

导入卵细胞（受精卵）可以获得稳定遗传的个体

检测目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性。类型检测内容方法分子水平的检测个体生物学水平的鉴定受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因目的基因是否转录出了mRNAPCR等技术目的基因是否翻译成蛋白质抗原-抗体杂交技术个体是否具有相应性状抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等04目的基因的检测与鉴定1.目的2.检测内容及方法

分子水平的检测1.基因是否插入染色体DNA（存在）非转基因棉花转基因抗虫棉阴性对照PCR04目的基因的检测与鉴定

分子水平的检测2.基因是否转录BtM3C0T-9T-2T-51T-5T-23T-11T-20T-21T-34T-10RT-PCR10个PCR阳性棉花植株中，有四株Bt基因发生转录04目的基因的检测与鉴定

分子水平的检测3.基因是否翻译为蛋白质Bt抗虫蛋白04目的基因的检测与鉴定

个体生物学水平的鉴定接种棉铃虫观察性状表现，或采摘抗虫棉的叶子饲喂棉铃虫，观察抗虫效果。04目的基因的检测与鉴定

04目的基因的检测与鉴定

获取质粒、噬菌体等载体筛选和获得目的基因用限制酶切割载体和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA连接酶连接，构建基因表达载体将含有目的基因的表达载体导入受体细胞检测和鉴定目的基因是否稳定维持和表达其遗传特性基因工程的基本操作程序

转基因抗虫棉在世界范围被广泛种植，有效控制了棉铃虫的种群数量，显著减少了农药的用量。面对棉铃虫的危害，有了抗虫棉是否就可以一劳永逸、高枕无忧呢？根据棉铃虫对传统农药产生抗性的发展历史，科研人员推测棉铃虫中存在对Bt抗虫蛋白产生抗性的可能。请你查阅资料，了解以下问题：1．在实际种植过程中，棉铃虫是否对转Bt基因的抗虫棉产生了严重的抗性？证据是什么？2．科研工作者在发现棉铃虫出现抗性之前，就应该想办法应对。他们想出的延缓棉铃虫对Bt抗虫蛋白产生抗性的措施有哪些？这些措施的原理是什么？有效吗？【到社会中去】学生课后自行讨论解答

DNA片段的扩增及电泳鉴定探究·实践（1）DNA片段的扩增①利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增。②PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。③PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器。一次PCR一般要经历30次循环。（2）DNA片段的电泳鉴定①DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。②PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色（EB染色），可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。实验原理

（1）仪器（2）用具PCR仪、微量离心管、微量移液器、一次性吸液枪头、电泳装置（包括电泳仪电泳槽等）4种脱氧核苷酸的等量混合液、2种引物、DNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水、电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等PCR仪微量离心管微量移液器电泳装置探究·实践DNA片段的扩增及电泳鉴定材料用具

微量离心管推动杆调节旋钮卸枪头按钮体积刻度吸液杆