《动物细胞培养》课件.pptVIP

*****************************动物细胞培养基动物细胞培养基是为动物细胞提供营养和生长因子的液体或固体介质。培养基的成分包括无机盐、氨基酸、维生素、糖类、脂类、生长因子和血清等。不同的细胞需要不同的培养基，以满足其生长和代谢的需求。选择合适的培养基是细胞培养成功的关键。常用的培养基包括DMEM、RPMI1640、MEM等。成分无机盐、氨基酸、维生素、糖类、脂类、生长因子、血清等。选择不同的细胞需要不同的培养基。常用培养基DMEM、RPMI1640、MEM等。细胞培养基的配制细胞培养基的配制需要严格按照配方进行，以确保培养基的成分和浓度符合要求。配制过程中需要使用高纯度的试剂和无菌的水。配制好的培养基需要进行pH值调节和过滤除菌。pH值是影响细胞生长的重要因素，需要维持在适宜的范围内（通常为7.2-7.4）。过滤除菌可以去除培养基中的微生物，防止细胞污染。配方严格按照配方进行。试剂使用高纯度的试剂和无菌的水。pH值调节至适宜范围（7.2-7.4）。除菌过滤除菌，防止细胞污染。细胞培养基添加剂为了满足细胞的特殊需求，通常需要在培养基中添加一些添加剂，如血清、生长因子、抗生素、谷氨酰胺等。血清是细胞培养中常用的添加剂，含有丰富的生长因子和营养物质，能够促进细胞的生长和增殖。生长因子可以刺激细胞的特定信号通路，促进细胞的分化和功能。抗生素可以抑制细菌污染，谷氨酰胺是细胞代谢的重要底物。血清提供生长因子和营养物质。生长因子刺激特定信号通路。抗生素抑制细菌污染。细胞培养基的储存细胞培养基的储存需要注意温度和光照。配制好的培养基通常储存在4℃冰箱中，避光保存。有些培养基需要分装成小份，以避免反复冻融。含有血清的培养基不宜长期储存，最好在配制后1-2周内使用。储存过程中需要定期检查培养基的pH值和颜色，如果发现异常，应立即更换。1温度4℃冰箱保存。2光照避光保存。3时间含有血清的培养基不宜长期储存。细胞培养基的灭菌细胞培养基的灭菌是防止细胞污染的重要措施。常用的灭菌方法包括过滤除菌和高压灭菌。过滤除菌适用于含有热敏性成分的培养基，使用孔径为0.22μm的滤膜过滤。高压灭菌适用于不含热敏性成分的培养基，在121℃、15psi条件下灭菌20分钟。灭菌后的培养基需要进行无菌检测，以确保灭菌效果。1过滤除菌适用于含有热敏性成分的培养基。2高压灭菌适用于不含热敏性成分的培养基。培养皿的选择培养皿是细胞培养的常用容器，常用的培养皿包括塑料培养皿、玻璃培养皿和微孔板等。塑料培养皿具有透明、轻便、一次性使用等优点，是细胞培养中最常用的容器。玻璃培养皿可以重复使用，但需要进行严格的清洗和灭菌。微孔板适用于高通量筛选和自动化培养。塑料培养皿透明、轻便、一次性使用。玻璃培养皿可重复使用，需要严格清洗和灭菌。微孔板适用于高通量筛选和自动化培养。细胞培养室的要求细胞培养室是进行细胞培养的场所，需要满足一定的要求，以保证细胞的正常生长和功能。细胞培养室需要保持清洁、干燥、通风良好，避免阳光直射。细胞培养室需要配备生物安全柜、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、超纯水系统等设备。细胞培养室需要定期进行消毒，防止微生物污染。环境清洁、干燥、通风良好，避免阳光直射。设备生物安全柜、二氧化碳培养箱、倒置显微镜、超纯水系统等。消毒定期消毒，防止微生物污染。细胞培养操作流程细胞培养的操作流程包括准备工作、细胞复苏、细胞接种、细胞传代、细胞观察、细胞冻存等。准备工作包括检查培养基、培养皿、试剂等是否符合要求。细胞复苏是将冻存的细胞恢复到生长状态。细胞接种是将细胞转移到新的培养皿中。细胞传代是将细胞从一个培养皿转移到多个培养皿中。细胞观察是使用倒置显微镜观察细胞的生长状态。细胞冻存是将细胞保存到低温环境中。1准备工作检查培养基、培养皿、试剂等。2细胞复苏将冻存的细胞恢复到生长状态。3细胞接种将细胞转移到新的培养皿中。无菌操作技术无菌操作技术是细胞培养成功的关键。无菌操作包括手部消毒、工作台消毒、器械消毒、培养基消毒、细胞消毒等。手部消毒是使用消毒液清洗双手。工作台消毒是使用消毒液擦拭工作台。器械消毒是使用高压灭菌或火焰消毒。培养基消毒是使用过滤除菌或高压灭菌。细胞消毒是使用抗生素或抗真菌剂。手部消毒使用消毒液清洗双手。工作台消毒使用消毒液擦拭工作台。器械消毒使用高压灭菌或火焰消毒。细胞接种与传代细胞接种是将细胞转移到新的培养皿中，使其能够继续生长和繁殖。细胞传代是将细胞从一个培养皿转移到多个培养皿中，以增加细胞的数量。细胞接种和传代需要注意细胞密度