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科研工程申请书＆开题报告

撰写技巧

以国家自然科学基金申请为例

二○一○年三月

;第一局部

如何撰写申请书

;一、摘要〔限400字〕

包括：研究方法、内容、目标、科学意义等;工程的题目;;鸡与鹌鹑的杂交是禽类中比较典型的远缘杂交，杂交存在着不亲和现象，杂交种胚胎早期死亡可能与其性分化有关，雌激素受体在调控家鸡胚胎性分化中起着重要的作用，但是否也在导致鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎早期死亡中起了关键作用，其调控机制如何，目前还不清楚。针对此问题，本研究首先对鸡、鹌鹑及其属间杂交种孵化早期胚胎进行组织切片观察，确定性分化的具体时间，在此根底上，利用原位杂交、半定量RT-PCR结合家禽性别PCR鉴定等技术，通过在性分化前利用雌激素和芳香化酶抑制剂诱导性反转的鸡、鹌鹑及杂交种孵化早期胚胎，结合正常生长的早期胚胎〔在性分化前后〕，对雌激素受体〔ER〕及其相关基因在早期胚胎发育中，尤其在性分化中所起的作用进行研究，并深入探讨ER等基因导致杂交种胚胎早期死亡的作用机理，为从分子水平上解释杂交种胚胎早期死亡的可能机制及探索克服杂交种胚胎早期死亡的可能途径奠定根底。;二、立论依据

对根底研究，着重结合国际科学开展趋势，

论述工程科学意义

对应用根底研究，着重结合学科前沿，围

绕国民经济和社会开展中的重要科技问题

论述其应用前景;在研究领域层面;1、工程的研究意义

撰写方法：

从领域入手，简述主要进展，引出热点研究方向。

围绕热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未

解决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述

如果解决了该问题〔研究目标〕，对该领域甚至相关

领域的科学奉献〔理论意义或应用前景〕。

;鸡与鹌鹑的杂交是禽类中比较典型的远缘杂交。鸡与鹌鹑分别属于鸟纲、鸡形目、雉科、雉亚科、雉族、鸡属〔Gallus〕和鹌鹑属〔Coturnix〕。鹌鹑蛋和肉质地细嫩，营养丰富味美可口、多汁，并含有芦丁药物成分，具有一定的食疗价值，但体形太小给屠宰带来一定难度。鸡的体形较???鹑来说比较大，肉、卵虽营养丰富但由于在长期强度选育过程中对肉品质重视不够，现在的鸡肉缺乏风味，已不能满足广阔人民群众对禽肉的需要。鸡与鹌鹑杂交，其杂交种综合了双方的体形、产肉、肉质的优点形成一新种群。鸡与鹌鹑的正交组合先后于美国、日本、马来西亚杂交成功，我国于1992年10月也首次在我们实验室杂交成功，填补了国内空白。经过十余年的努力，并通过改进人工输精技术等使受精率达53%；孵化率达14.2%〔赵宗胜，2005〕，两项指标均超过日本的25%和11%的水平。

鸡与鹌鹑属间杂交与大多数远缘杂交一样，仍然面临异种生殖细胞的不亲和及杂种不育的问题。Yoshihiro〔1982〕在研究鸡与鹌鹑杂交种的性比率时发现，入孵3-5天的子一代雏胚有公有母，而在以后各阶段以及出壳后通过细胞学检验全部为雄性。观察了孵化3天的受精蛋说明母雏胚胎发育不正常，透明带几乎不分化或分化不正常，表现为细胞团块，而有ZZ染色体的大多数子一代胚胎能正常发育，杂种雌性胚胎早期死亡，并推测鹌鹑的W染色体可能是杂种胚胎死亡及种间杂交出现性比率失调的主要原因，但其调控机制还不清楚。

;焦丽萍等〔2001〕通过对死亡受精蛋剖检，发现杂交胚胎死亡大多集中于入孵的3-5天。赵宗胜等〔2003〕通过对孵化出的杂交种解剖观察，发现存活的都为有典型睾丸器官的雄性个体，但其成年个体和幼年个体的睾丸在形态大小等方面没有差异，说明睾丸未发育，这些实验都与Yoshihiro的结果相符，说明杂交胚早期死亡确实与其性分化存在着一定的联系，因此为深入探讨杂交种胚胎早期死亡的可能原因，利用分子生物学技术对早期发育胚胎的性别进行鉴定就显得很有必要，我们实验室从2003年起分别在包括鸡和鹌鹑W染色体的Wpkci区段等处设计了6对引物进行鸡与鹌鹑的性别鉴定研究，经过PCR特异性扩增结果说明这几对引物都可用于家鸡的性别鉴定，其中只有一对引物可特异地扩增出鹌鹑W染色体上的条带，但杂带较多，扩增效果不好；因此我们重新设计了一对引物利用RT-PCR的方法对鹌鹑和杂交种的性别进行鉴定，获得比较好的结果，应用于对早期胚胎的性别鉴定，也得出了肯定的结论。利用这些研究结果，对孵化2.8天到14天存活的杂交胚胎进行性别鉴定，发现在早期胚胎的性别有公有母，但到了后期，特别是孵化第7天以后没有雌性胚胎出现，结合Yoshihiro〔1982〕的结果和对孵化出的杂交种解剖观察试验都证实杂交种早期胚胎死亡时间主要集中于2.8天到5天。对于鸡来讲，其孵化期为21天，性分化的时间约在孵