突触黏附样分子LRFN5在青春期雄性小鼠抑郁样行为中的作用及机制.pdf

华中科技大学硕士学位论文

摘要*

目的：富亮氨酸重复序列和含纤维连接蛋白III结构域蛋白（leucine-richrepeatand

fibronectinIIIdomain-containingproteins，LRFNs）在调控大脑突触发育和功能中发

挥重要作用。LRFN5基因改变与精神疾病包括抑郁症的发生风险相关，但其在抑郁

症发病过程中的作用及机制仍不清楚。本文采用母婴分离模型，探讨LRFN5在母婴

分离所致青春期小鼠抑郁样行为中的作用及机制。

方法：出生早期采用小鼠母婴分离模型，青春期给予阈下社会挫败应激或阈下可变

应激，通过社会接触实验、悬尾实验、强迫游泳实验以及糖水偏好实验，观察其对

应激的易感性。背侧齿状回区注射LRFN5过表达及沉默病毒，腹腔注射蛋白酪氨酸

磷酸酶受体δ（proteintyrosinephosphatasereceptordelta，PTPRD）抑制剂。酶联免

疫吸附实验检测血清皮质酮水平；实时荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检

测LRFN5mRNA和突触相关蛋白的表达变化；免疫荧光实验检测突触和神经发生

改变。

结果：（1）母婴分离导致雌性、雄性小鼠青春期体重增加，雄性小鼠血清皮质酮水

平升高。给予阈下可变应激增加青春期雄性小鼠在强迫游泳实验中的不动时间，降

低糖水偏好率，表现出对应激的易感性增加。（2）母婴分离导致青春期雄性小鼠背

侧齿状回区LRFN5表达水平上调。（3）经历母婴分离的青春期雄性小鼠在给予阈下

社会挫败应激后出现社会接触比值下降、悬尾和强迫游泳实验中的不动时间延长、

糖水偏好率下降等抑郁样行为，同时海马背侧齿状回区LRFN5蛋白水平上调。（4）

背侧齿状回区过表达LRFN5基因诱导青春期雄性小鼠出现抑郁样行为，同时对应激

的易感性增加。（5）沉默背侧齿状回区LRFN5基因降低母婴分离所致青春期雄性小

鼠对应激的易感性。（6）腹腔注射PTPRD抑制剂7-丁氧基吲哚酸类似物（7-butoxy

illudalicacidanalog，7-BIA）改善背侧齿状回区LRFN5基因过表达诱导的青春期雄

*本文的研究工作得到国家自然科学基金项目的资助（No）。

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性小鼠的抑郁样行为。（7）母婴分离或LRFN5基因过表达均使青春期雄性小鼠背侧

齿状回区突触前活性区蛋白Bassoon和兴奋性突触后致密区-95蛋白表达上调。（8）

腹腔注射PTPRD抑制剂7-BIA降低背侧齿状回区LRFN5基因过表达引起的Bassoon

荧光强度增加。（9）母婴分离或背侧齿状回区过表达LRFN5基因均使青春期雄性小

鼠海马新生神经元和未成熟神经元密度下降，神经发生受损。

结论：小鼠出生早期经历母婴分离增加青春期雄性小鼠背侧齿状回区LRFN5表达水

平，LRFN5通过与其受体PTPRD结合，增加兴奋性突触蛋白数量并使海马神经发

生受损，从而促进小鼠对应激的易感性。特异性沉默背侧齿状回区LRFN5基因或腹

腔注射PTPRD抑制剂均改善早期母婴分离所致青春期雄性小鼠的抑郁样行为。

关键词：母婴分离；阈下社会挫败应激；青春期；抑郁样行为；LRFN5；兴奋性突

触

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目录

中英文缩写对照表1

摘要3

ABSTRACT5

1.前言7

2.材料与方法10

2.1实验材料10

2.1.1实验动物10

2.1.2实验仪器10

2.1.3实验试剂及药品11

2.2实验方法13

2.2.1小鼠母婴分离模型13

2.2.2小鼠青春期“二次应激”模型13

2.2.3行为学检测14

2.2.4脑立体定位注射17

2.2.5小鼠腹腔注射18

2.2.6小鼠脑