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毕业设计（论文）

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动植物基因编辑体系构建

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动植物基因编辑体系构建

摘要：随着生物技术的快速发展，基因编辑技术在动植物改良和疾病治疗等领域展现出巨大的应用潜力。本文针对动植物基因编辑体系构建，综述了CRISPR/Cas9、TALENs、ZFNs等基因编辑技术的原理、操作流程和优缺点，并探讨了基因编辑技术在动植物育种、疾病治疗和生物制药等领域的应用前景。此外，还分析了我国在基因编辑技术研究和应用方面的现状和挑战，提出了相关对策和建议。

近年来，基因编辑技术作为一项革命性的生物技术，在动植物育种、疾病治疗和生物制药等领域取得了显著的成果。CRISPR/Cas9、TALENs、ZFNs等基因编辑技术的出现，为动植物基因组的精确修饰提供了新的手段。本文旨在综述动植物基因编辑体系构建的相关技术，探讨其在不同领域的应用前景，并为我国基因编辑技术的发展提供参考。

一、基因编辑技术概述

1.1基因编辑技术原理

基因编辑技术原理涉及对生物体内特定基因序列的精确修饰，旨在实现对基因组结构的精准操控。这一技术基于对DNA双链断裂的识别和修复机制的研究，通过设计特定的核酸序列引导酶（如Cas9蛋白）到达目标基因位点，引发DNA双链断裂。随后，细胞自身的DNA修复机制被激活，包括非同源末端连接（NHEJ）和同源重组（HR）两种途径，从而实现对基因序列的精确修改。

在CRISPR/Cas9技术中，CRISPR（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）是一种存在于细菌和古细菌中的天然防御机制，它能够识别并破坏入侵的病毒DNA。Cas9蛋白则是一个由CRISPR系统进化而来的核酸酶，能够识别并结合到特定的DNA序列上。在基因编辑过程中，科学家首先设计一段与目标基因序列高度互补的sgRNA（single-guideRNA），sgRNA包含一个与目标序列配对的结合域和一个Cas9蛋白的结合域。Cas9蛋白与sgRNA结合后，能够精确地定位到目标DNA序列，并在其上引入双链断裂。

(1)双链断裂后，细胞会通过NHEJ或HR两种方式进行修复。NHEJ是一种非精确的修复方式，它通常会导致插入或缺失突变，从而改变基因的表达。HR则是一种精确的修复方式，它依赖于供体DNA模板进行修复，可以用于精确地插入或替换基因序列。通过选择合适的修复途径，科学家可以实现对基因的精准编辑。

(2)以CRISPR/Cas9技术为例，2012年，Jinek等科学家首次报道了CRISPR/Cas9技术，这一技术因其简便、高效和低成本的优点迅速成为基因编辑领域的热点。2015年，这项技术被用于治疗β-地中海贫血症，通过将正常的β-珠蛋白基因插入到患者的β-珠蛋白基因中，成功治愈了该疾病。此外，CRISPR/Cas9技术还被用于基因驱动（genedrive）的研究，旨在控制害虫和疾病传播媒介。

(3)除了CRISPR/Cas9，还有其他基因编辑技术，如TALENs（TranscriptionActivator-LikeEffectorNucleases）和ZFNs（ZincFingerNucleases）。TALENs技术利用转录激活因子样效应器蛋白（TALE）蛋白的DNA结合能力，设计特定的DNA结合域来引导核酸酶切割目标基因。ZFNs技术则通过锌指蛋白与DNA的结合来实现对特定基因的切割。这些技术的出现丰富了基因编辑的手段，使得基因编辑技术更加成熟和多样化。

1.2常用基因编辑技术比较

基因编辑技术家族中，CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs是最为常用的三种技术。它们在原理、操作复杂度、成本和编辑效率等方面各有特点。

(1)CRISPR/Cas9技术以其操作简便、成本低廉和编辑效率高而受到广泛关注。它利用sgRNA引导Cas9蛋白到目标位点，实现DNA双链断裂。据统计，CRISPR/Cas9在动物细胞中的编辑效率可达90%以上，而在植物细胞中，编辑效率也超过70%。例如，在人类细胞中，CRISPR/Cas9已成功用于治疗镰状细胞性贫血症，通过替换突变基因来纠正疾病。

(2)TALENs技术类似于CRISPR/Cas9，它通过设计特定的DNA结合域引导核酸酶切割目标基因。TALENs在编辑效率上与CRISPR/Cas9相当，但在操作复杂度上略高，需要针对每个目标序列设计特定的TALEN蛋白。TALENs技术在植物和动物细胞中的应用也十分广泛，例如，在水稻中通过TALENs技术成功编辑了抗虫基因，提高了作物的抗虫性。

(3)ZFNs技