体内药物分析方法与实验技巧课件.ppt

*********************5.1质谱检测原理质谱检测的原理是将样品分子离子化，然后根据离子的质荷比（m/z）进行分离和检测。离子化是指将中性分子转化为带电离子的过程；质荷比是指离子的质量与电荷之比；质谱仪根据离子的质荷比将离子分离，并检测各种离子的丰度。通过分析质谱图，可以获得化合物的分子量和结构信息，从而实现对化合物的定性和定量分析。1离子化分子转化为离子。2质荷比离子的质量与电荷之比。3分离与检测根据质荷比分离离子。5.2离子源类型及选择LC-MS常用的离子源包括电喷雾离子源（ESI）、大气压化学离子源（APCI）、基质辅助激光解吸电离源（MALDI）等。ESI适用于极性较强的化合物的离子化；APCI适用于极性较弱的化合物的离子化；MALDI适用于大分子化合物的离子化。在选择离子源时，应根据分析物的性质和分析的目的来综合考虑。选择合适的离子源，可以提高分析的灵敏度和选择性。ESI适用于极性化合物。APCI适用于极性较弱化合物。5.3常见质量分析器LC-MS常用的质量分析器包括四极杆质量分析器、飞行时间质量分析器、离子阱质量分析器等。四极杆质量分析器具有扫描速度快、分辨率适中、成本较低等优点；飞行时间质量分析器具有分辨率高、质量范围广、灵敏度高等优点；离子阱质量分析器可以进行多级质谱分析，提供更多的结构信息。在选择质量分析器时，应根据分析的目的和分析的要求来综合考虑。质量分析器特点应用四极杆扫描速度快常规分析飞行时间分辨率高高精度分析6.毛细管电泳技术毛细管电泳（CE）是一种分离分析技术，它利用电场驱动带电粒子在毛细管中迁移，根据粒子的大小、电荷和形状的不同，实现各组分的分离。CE具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、应用范围广等优点，广泛应用于药物分析、蛋白质组学、DNA分析等领域。分离电场驱动分离。检测检测器检测组分。6.1基本原理CE的基本原理是利用带电粒子在电场中的迁移速度不同，当施加电场时，带电粒子在毛细管中迁移，迁移速度与粒子的电荷、大小和形状有关。电荷越大、体积越小、形状越规则的粒子，迁移速度越快；电荷越小、体积越大、形状越不规则的粒子，迁移速度越慢。通过检测器检测流出毛细管的组分，可以实现对样品中各组分的定性和定量分析。电场驱动带电粒子迁移。电泳迁移率与电荷、大小、形状有关。6.2仪器组成及选择CE的仪器组成主要包括电源、进样器、毛细管、检测器和数据处理系统。电源用于提供电场；进样器用于将样品注入毛细管；毛细管是实现分离的核心部件；检测器用于检测流出毛细管的组分；数据处理系统用于采集、处理和分析检测器输出的信号。在选择CE仪器时，应根据分析的目的、样品的性质和分析的要求来综合考虑。电源提供电场。毛细管实现分离。检测器检测组分。6.3应用领域及特点CE的应用领域非常广泛，包括药物分析、蛋白质组学、DNA分析、食品分析、环境分析等。CE具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、自动化程度高等特点，特别适用于复杂生物样品的分析。与其他分离技术相比，CE具有更高的分离效率和更快的分析速度，但其灵敏度相对较低。1药物分析药物含量测定、杂质分析。2蛋白质组学蛋白质分离、肽图分析。3DNA分析DNA片段分离、基因分型。7.免疫分析技术免疫分析是一种利用抗原抗体特异性结合反应进行分析的技术。免疫分析具有灵敏度高、选择性好、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于临床诊断、食品安全、环境监测等领域。常用的免疫分析方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、化学发光免疫测定（CLIA）等。1抗原2抗体3结合7.1基本原理免疫分析的基本原理是利用抗原抗体之间的特异性结合反应。抗原是指能够刺激机体产生抗体的物质；抗体是指机体在抗原刺激下产生的能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗原抗体结合形成免疫复合物，通过检测免疫复合物的量，可以实现对样品中抗原或抗体的定性和定量分析。免疫分析的灵敏度和选择性取决于抗原抗体的特异性结合能力。抗原抗体结合特异性结合反应。免疫复合物抗原抗体结合产物。7.2常见免疫分析法常用的免疫分析法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、化学发光免疫测定（CLIA）、免疫荧光测定（IFA）等。ELISA是应用最广泛的免疫分析方法，它利用酶标记的抗体或抗原进行检测；RIA利用放射性同位素标记的抗体或抗原进行检测；CLIA利用化学发光物质标记的抗体或抗原进行检测；IFA利用荧光染料标记的抗体进行检测。选择合适的免疫分析方法，可以提高分析的灵敏度和选择性。ELIS