免疫组化医学宣教.ppt

一、原理与方法;Esophagealcarcinoma

E-cad+inmembrane

WuMing-Yaoetal.;尖锐湿疣HPVIHC×200郭煜2007;原位癌IHC×400

胡彬2007;左）Ii（?200/400）;双标染色;二、免疫组织化学技术的主要步骤与常用标记物;（二）常用标记物

1．酶为最常用的标记物。作为标记的酶应具有以下条件：①底物是特异性的，且易于显示；②酶反应产物稳定，不易扩散；③容易获得纯酶分子且较稳定；④酶标记抗体后，不影响两者的活性；⑤被检组织中不应存在内源性相同的酶或其底物。常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）、硷性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOD）等。

2．荧光素指在高能量光波的激发下能产生荧光的物质。常用的有异硫氰酸荧光素（FITC）、四甲基异硫氰酸罗达明（TRITC）。

3．生物素其与卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。

4．金属标记物如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。;三．常用免疫组织化学染色方法;（二）间接法

先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异性抗体，二抗仅有种族特异性。

特点:⑴预先标好二抗，较方便；

⑵比直接法敏感，但仍差。;（三）PAP法与双PAP法：

既过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(PerixidaseAntiperoxidaseComplexMethod,PAP)

先将过氧化物酶（HRP）免疫兔/羊/鼠，制成兔/羊/鼠抗ＨＲＰ；然后再与ＨＲＰ结合，形成一个稳定的多角形结构（PAP）。

特点：⑴敏感性较高；

⑵背景染色低（相对）；

⑶双PAP敏感性更高，但背景相对较重。;（四）ABC法：1981年美籍华人许世明发明了ABC法Vector

既卵白素－生物素过氧化物酶复合物法(AvidinBiotin-peroxidaseComplex,ABC)

利用卵白素与生物素特有的高度亲和力，先将生物素与酶结合形成生物素化HRP，再以生物素化HRP与卵白素按一定比例混合，形成一个复合物；同时先将二抗生物素化。;

１．如将卵白素换成链霉亲和素，则为：

ＳＡＢＣ法：(StreptAvidinBiotin-peroxidaseComplex)

２．将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：

ＬＳＡＢ法：labelledStreptAvidin-Biotin

３．用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧???物酶，则为：

Ｓ－Ｐ法：(StreptAvidinPeroxidaseconjugataedmethod)

特点:⑴敏感性高，（比ＰＡＰ高８～４０倍）；

⑵背景淡，链霉亲和素更好；

⑶方法较简便，时间较短；

⑷应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。;。;;免疫组化阳性结果色度;免疫细胞化学阳性结果定位分布;免疫细胞化学阳性结果定位分布;免疫细胞化学阳性结果定位分布;免疫细胞化学阳性结果定位分布;免疫细胞化学阳性结果定位分布;免疫组化阳性结果定位分布;免疫组化阳性结果强度;四．免疫组织化学染色过程中需注意的有关事项;2．假阳性反应：

1）Non-specificreaction(非特异性反应)：边缘现象、皱折和刀痕、出血和

坏死等

2）Endogenousperoxidase(内源性过氧化物酶}：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞

皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、肝等；

3）Cross-reactive(交叉反应)：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成分；

4）Reagentconcentrationistoohighorinvalid试剂浓度过高或失效。

;;;未封闭内源性过氧化物酶;;;3．假阴性反应：

⑴组织固定不当或固定时间过长；

⑵抗体效价过低或久置失效；

⑶组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔；

⑷DAB或H2O2的浓度不当。;五、免疫组织化学在肿瘤诊断和鉴别诊断中的应用;（二）各种不同组织及其肿瘤常见的标记物：

1．上皮组织及其肿瘤标记物：

（１）存在于所有上皮细胞内的标记物：

①桥粒蛋白（desmoplak