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实验三小白鼠骨髓染色体制备及观察1、实验目的与要求⑴掌握动物骨髓细胞染色体制备技术⑵学会动物细胞的滴片方法⑶观察小白鼠染色体的形态特征和染色体数目小鼠骨髓细胞01秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤体的形成，把分裂细胞阻截在中期。02通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、染色等处理，可观察到小鼠染色体。03这种骨髓染色体制片方法简单，取材容易，不需无菌条件，方便易行。042、实验原理健康小鼠(Musmusculus2n=40)，体重约18～20g，雌雄不限。实验动物01甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、生理盐水试剂023、实验材料实验器材恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、离心管(5～10mL)、吸管注射器(5mL)、100mL烧杯、载玻片（冰片）3、实验材料0.01％秋水仙素：称10mg秋水仙素，溶于100mL生理盐水中。ADBC低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000mL蒸馏水中，其浓度为0.075M。2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于100ml蒸馏水中。Giemsa溶液溶液配制：3、实验材料秋水仙素注射01解剖小鼠02离心03低渗04固定05制备细胞悬浮液06滴片07空气干燥08染色09水洗10显微镜观察结果114、实验方法主要实验步骤方法与步骤取材前3～4h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。腹腔内注射秋水仙素3~4小时后，
断头处死小鼠。取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液进行预固定，轻轻混匀后，离心。1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液，混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液，将细胞重悬。预冷的玻片滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染液染色10~15分钟，弃去染液，水洗，镜检。*
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