牛传染性鼻气管炎病毒实验室检测方法研究进展.docx

毕业设计（论文）

PAGE

1-

毕业设计（论文）报告

题目：

牛传染性鼻气管炎病毒实验室检测方法研究进展

学号：

姓名：

学院：

专业：

指导教师：

起止日期：

牛传染性鼻气管炎病毒实验室检测方法研究进展

摘要：牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）是一种重要的牛呼吸道疾病病原体，对养牛业造成严重经济损失。近年来，随着分子生物学技术的快速发展，实验室检测方法在IBRV的病原学诊断中发挥着越来越重要的作用。本文综述了近年来IBRV实验室检测方法的研究进展，包括病毒分离培养、免疫学检测、分子生物学检测等方面的研究动态。通过对比分析各种检测方法的优缺点，为IBRV的实验室检测提供了参考依据，为我国养牛业的健康发展提供了科学依据。

牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）是一种单股正链RNA病毒，属于呼肠孤病毒科。IBRV感染牛群后，可引起牛呼吸道症状，严重时导致死亡，给养牛业造成巨大的经济损失。因此，对IBRV的早期、快速、准确的诊断具有重要意义。随着分子生物学技术的快速发展，实验室检测方法在IBRV的诊断中得到了广泛应用。本文将对近年来IBRV实验室检测方法的研究进展进行综述，以期为进一步研究和应用提供参考。

一、IBRV病毒分离培养方法

1.1病毒分离培养的原理

病毒分离培养是病原微生物学研究中的重要技术手段，其原理基于病毒对宿主细胞的选择性和依赖性。首先，病毒需要侵入宿主细胞，利用宿主细胞的生物合成机制来复制自己的遗传物质并生产新的病毒颗粒。这个过程涉及到病毒的吸附、进入、复制、组装和释放等多个步骤。在病毒分离培养中，通常使用含有宿主细胞的培养液作为培养基，这些细胞可以是原代细胞、传代细胞或细胞系。病毒通过与宿主细胞表面的特定受体结合而吸附，随后进入细胞内部，其遗传物质在宿主细胞的核糖体上被翻译成病毒蛋白，这些蛋白随后组装成新的病毒颗粒。

病毒分离培养的关键在于提供一个适合病毒生长的环境。这包括维持细胞培养液的适宜pH值、温度、氧气供应和营养成分。病毒在不同的细胞类型上生长的能力不同，因此选择合适的细胞系对于成功分离病毒至关重要。例如，IBRV在牛肺泡上皮细胞（BPEL-1）或牛肾细胞（MDBK）等细胞系中具有良好的复制能力。在培养过程中，病毒会破坏宿主细胞，导致细胞出现病变或死亡，这一现象称为细胞病变效应（CPE）。通过观察细胞病变，研究人员可以确认病毒的存在，并进一步纯化和鉴定病毒。

病毒分离培养的另一个重要方面是病毒的传代。将初次分离到的病毒接种到新的宿主细胞中，可以增加病毒的滴度并维持其遗传稳定性。传代过程中，需要对病毒进行定期的鉴定和检测，以确保其特异性和纯度。此外，为了防止病毒变异和污染，实验室操作需遵循严格的无菌技术规范，并定期对培养设备和环境进行消毒。通过这些步骤，病毒分离培养技术为病原微生物的鉴定、研究和疫苗制备提供了有力的工具。

1.2常用病毒分离培养方法

(1)病毒分离培养的传统方法包括细胞培养和鸡胚接种。在细胞培养中，常用的细胞系包括BHK-21、MDCK和Vero等，它们对多种病毒具有良好的吸附和繁殖能力。例如，使用MDCK细胞系分离培养IBRV，通常在48小时内即可观察到明显的细胞病变。据研究，IBRV在MDCK细胞上的繁殖滴度可达10^8.0TCID50/mL。在实际应用中，研究人员利用MDCK细胞成功从感染牛中分离出IBRV，为后续的病毒学研究和疫苗制备提供了基础。

(2)鸡胚接种是一种较早的病毒分离方法，主要利用鸡胚的敏感性和病毒在鸡胚中繁殖的能力。通过将病毒接种到鸡胚尿囊腔，病毒可以在胚内增殖，并通过尿囊液收集。这种方法在分离许多动物病毒，如新城疫病毒、流感病毒等，都取得了良好的效果。例如，在分离IBRV时，研究人员发现病毒在鸡胚尿囊腔中的繁殖时间约为72小时，病毒滴度可达到10^6.5EID50/mL。鸡胚接种方法在早期病毒分离中发挥了重要作用，但由于其操作复杂、周期较长，目前已被细胞培养方法部分替代。

(3)随着分子生物学技术的不断发展，病毒分离培养方法也得到了改进。例如，使用组织培养板（TissueCulturePlates，TCP）进行病毒分离培养，可以简化操作步骤，缩短分离时间。据实验数据，使用TCP分离培养IBRV，病毒滴度可达10^7.5TCID50/mL，且操作简便，易于观察细胞病变。此外，随着高通量检测技术的发展，病毒分离培养结合实时荧光定量PCR技术，可以实现对病毒滴度的快速、准确检测，为病毒学研究提供了有力支持。例如，在分离猪瘟病毒时，结合TCP和实时荧光定量PCR技术，研究人员在接种后24小时内即可检测到病毒，有效缩短了病毒分离培养时间。

1.3病毒分离培养方法的优缺点

(1)病毒分离培养方法的优点主要体