网站大量收购独家精品文档,联系QQ:2885784924

DB22T 2922-2018 鸡传染性支气管炎病毒检测 荧光RT-PCR法.docxVIP

DB22T 2922-2018 鸡传染性支气管炎病毒检测 荧光RT-PCR法.docx

  1. 1、本文档共8页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

ICS11.220B41

DB22

吉林省地方标准DB22/T2922—2018

鸡传染性支气管炎病毒检测荧光RT-PCR法

DetectionofchickeninfectiousbronchitisvirusReal-timePCRmethod

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T2922—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位:吉林省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人:呼延含蓉、程荣华、柴方红、张淑莹、王楠、于钦磊、高春生、吴丹、孙亮、马晓媛、卢松岩、付瑶、王建超、陆伟、何浩、傅国群。

1

DB22/T2922—2018

鸡传染性支气管炎病毒检测荧光RT-PCR法

1范围

本标准规定了鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测方法的材料、操作步骤和结果判定。本标准适用于鸡传染性支气管炎的诊断、监测及流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3材料

3.1仪器设备

3.1.1干热灭菌箱。

3.1.2高压蒸汽灭菌器。160℃。

3.1.3冰箱,2℃~8℃,-20℃和-80℃三种。

3.1.4恒温水浴锅,控温范围为室温至100℃。

3.1.5可调移液器,最大量程为10μL,200μL,1000μL。

3.1.6高速冷冻离心机,12000r/min以上。

3.1.7荧光定量PCR扩增仪。

3.2器械与耗材

3.2.1医用棉签。

3.2.2医用剪刀,16cm。

3.2.3医用镊子,16cm。

3.2.41.5mL离心管,15mL离心管,50mL离心管。

3.2.5组织匀浆器或研钵。

3.2.6吸头,10μL,200μL,1000μL。

3.2.7荧光PCR管。3.3试剂

除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯,实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。3.3.10.02mmol/LPBS,见附录A。

3.3.2RNA提取试剂盒。

3.3.3荧光RT-PCR反应液。

3.3.4灭菌双蒸水。

2

DB22/T2922—2018

3.3.5阳性对照,鸡传染性支气管炎病毒S1基因序列片段,见附录B。

3.4引物和探针

3.4.1引物和探针序列见表1。

表1引物和探针序列

名称

序列

上游引物F

5-ATCCTTTTATTAATAGTA-3

下游引物R

5-TAGTTTCTAGTCTAAAATTAC-3

探针P

5-CAAACACAAACAGCTCAGAGT-3

3.4.2引物和探针均用灭菌双蒸水稀释成10μmol/L,-20℃保存备用。

4操作步骤

4.1采样器具前处理

4.1.1组织匀浆器或研钵(3.2.5)、医用剪刀(3.2.2)、镊子(3.2.3)经160℃干热(3.1.1)灭菌2h。

4.1.21.5mL离心管(3.2.4)经121℃±2℃高压蒸汽(3.1.2)灭菌15min。

4.2样品的采集、贮运和保存

4.2.1棉拭子样品的采集

将医用棉签(3.2.1)深入喉头上腭及上腭裂来回刮3次~5次,使其蘸有咽喉分泌液,然后将咽喉拭子放入盛有1.0mLPBS(3.3.1)的离心管中,编号备用。

4.2.2组织样品的采集

采集鸡气管的下1/3段和肺脏,置于无菌离心管(15mL或50mL)。

4.2.3样品的贮运

样品采集后应置于加冰袋的保温箱中、密封,24h内送至实验室进行处理,超过24h应冷冻保存。

4.3样品的处理

4.3.1棉拭子的处理

将装有棉拭子的离心管反复震荡离心,3000r/min离心15min,取上清液待检。

4.3.2组织样品的处理

将组织样品按1:10比例加入PBS,用组织匀浆器或研钵研磨匀浆,3000r/mi

文档评论(0)

天使之恋 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档