DB22T 2929-2018 转基因玉米种cry3类基因定性检测 PCR法.docxVIP

ICS65.020.20B05

备案号：62774-2019DB22吉林省地方标准

DB22/T2929—2018

转基因玉米中cry3类基因定性检测PCR法

Qualitativedetectionofcry3typegenesingeneticallymodifiedmaize—PCRmethod

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T2929—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：李飞武、李葱葱、夏蔚、龙丽坤、闫伟、董立明、邢珍娟、谢彦博、刘娜。

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DB22/T2929—2018

转基因玉米中cry3类基因定性检测PCR法

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题，使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本标准规定了PCR方法定性检测转基因玉米中cry3类基因的原理、试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理、检出限、质量保证和控制、试验报告。

本标准适用于转基因玉米MIR604、MON863、MON88017等转化体及其衍生品种的玉米植株、籽粒等初级产品中cry3类基因的PCR定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

DB22/T2527-2016转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法

农业部1485号公告-4-2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

农业部1861号公告-3-2012转基因植物及其产品成分检测玉米内标准基因定性PCR方法农业部2031号公告-19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

zSSIIb基因zSSIIbgene

编码玉米淀粉合酶异构体zSTSII-2的基因。3.2

Cry3类基因cry3typegenes

编码苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）Cry3类杀虫晶体蛋白的一类基因，在本标准中包括cry3A基因和cry3Bb基因。

4原理

根据转基因玉米中cry3类基因的保守序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期232bp的DNA片段，判断样品中是否含有cry3类基因成分。

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DB22/T2929—2018

5试验条件

常温条件下。DNA提取、PCR体系配制、PCR扩增、电泳等功能区宜采取物理隔离措施，避免产生交叉污染。

6试剂或材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂。

6.1水：重蒸馏水或符合GB/T6682规定的二级水。6.2琼脂糖。

6.310g/L溴化乙锭（EB）溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。注：可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。

6.410mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠（NaOH），溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。

6.5500mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（pH8.0）：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液（见6.4）直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液（见6.4）调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa（121℃)条件下灭菌20min。

6.61mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）溶液（pH8.0）：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0，