苦荞FtNAC16、FtNAC33、FtNAC64基因的克隆、功能及序列变异研究.pdf

目录

摘要I

ABSTRACTIV

1绪论1

1.1植物次生壁的研究进展1

1.1.1植物次生壁的组成与功能1

1.1.2植物次生壁合成相关转录因子的研究进展1

1.1.3植物次生壁生物合成调控网络的研究进展2

1.2NAC转录因子的研究进展3

1.2.1NAC转录因子的结构与功能3

1.2.2NAC转录因子调控植物次生壁生物合成相关的研究进展...4

1.3苦荞脱壳性及次生壁生物合成的研究进展4

1.3.1苦荞脱壳性研究概况4

1.3.2苦荞次生壁生物合成的研究进展5

1.4本研究的意义6

1.5本研究的技术路线7

2材料与方法8

2.1实验材料8

2.1.1植物材料8

2.1.2菌株及载体8

2.1.3主要实验试剂及仪器8

2.1.4实验所需培养基8

2.2取材方法10

2.2.1苦荞的花朵标记10

2.2.2苦荞提取总RNA样品的取样10

2.2.3次生壁含量检测的取样10

2.2.4重测序材料的取样10

2.3实验方法10

2.3.1纤维素、木质素和半纤维素的含量测定10

2.3.2形态结构观察12

2.3.3苦荞总RNA的提取及第一链cDNA的合成12

2.3.4FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64基因克隆及序列分析13

2.3.5FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的生物信息学分析14

2.3.6FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的亚细胞定位分析14

2.3.7FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的转录激活活性分析15

2.3.8FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64不同组织部位表达分析..16

2.3.9FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的转基因功能分析16

2.3.10FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的序列变异分析20

3结果与分析22

3.1FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64基因的克隆22

3.2FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的生物信息学分析24

3.2.1蛋白特征分析24

3.2.2多序列比对及系统进化树分析25

3.3FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的亚细胞定位分析28

3.4FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的转录激活活性分析28

3.5FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64与下游基因的表达分析29

3.5.1FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的时空表达分析29

3.5.2下游基因在苦荞籽粒不同发育时期的表达分析31

3.6厚壳苦荞和薄壳苦荞的果壳中次生壁组分含量差异分析32

3.7FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64在苦荞中的功能验证35

3.7.1FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64植物表达载体的构建35

3.7.2转基因毛状根的遗传转化及阳性株系筛选37

3.7.3转基因毛状根中的表达分析39

3.7.4转基因毛状根扫描电镜及番红固绿石蜡切片结果分析40

3.7.5转基因毛状根中细胞壁厚度和次生壁组分的含量分析43

3.7.6转基因毛状根次生壁生物合成途径下游基因的表达分析...44

3.8FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64的序列变异分析48

4讨论50

4.1FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64是具有转录调控作用的NAC

家族成员50

4.2FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64可能参与调控苦荞次生壁的生

物合成50

4.3FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64可能通过调控相关基因的表达

参与苦荞果壳次生壁合成50

4.4FtNAC16、FtNAC33和FtNAC64促进果壳中次