DB22T 1254-2011 粮谷中伏马毒素B1的测定方法快速超高效液相色谱法　　.docxVIP

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吉

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地

DB22

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DB22/T1254—2011

粮谷中伏马毒素B1的测定方法快速超高效液相色谱法

Determinationoffumonisinscontentingrainsbyultrahigh-performanceliquidchromatography

2011-12-15发布2011-12-31实施吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T1254—2011

前言

本标准编写的格式、结构和内容均按照GB/T1.1-2009给出的规则进行起草。

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由吉林省粮食局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省粮油科学研究设计院、国家粮食局科学研究院。

本标准主要起草人：朱铁军、王松雪、谢刚、孟凡刚、李莉、矫珑、王曼、张艳、张忠杰、曹阳、薛恩儒。

本标准于2011年12月15日首次发布。

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DB22/T12542011

粮谷中伏马毒素B1的测定方法快速超高效液相色谱法

1范围

本标准规定了粮食及其制品中伏马毒素(FB、FB?)含量的免疫亲和柱净化、超高效液相色谱法测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤及结果表示。

本标准适用于小麦、玉米和玉米制品中伏马毒素的测定。本标准方法检出限：FB?、FB?为0.05mg/kg。

2规范性引用文件

本标准中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适

用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

利用免疫亲和反应净化样品，以邻苯二甲醛柱前衍生伏马毒素为荧光化合物，用反相超高效液相色谱进行分离、检测，外标法测定伏马毒素B?、B?的含量。

4试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中一级用水要求。

4.1甲醇：色谱纯，或纯度相当。

4.2乙腈：色谱纯，或纯度相当。

4.3乙酸：色谱纯，或纯度相当。

4.4四硼酸钠(Na2B407·10H20)。

4.5氯化钠。

4.6磷酸氢二钠。

4.7磷酸二氢钾。

4.8氯化钾。

4.9浓盐酸。

4.10磷酸。

4.11邻苯二甲醛(OPA)。

4.122-硫基乙醇(MCE)。

4.130.1mol/L磷酸二氢钠溶液：称取15.6g磷酸二氢钠(4.3),用水溶解并定容为1L。

4.140.1mol/L四硼酸钠溶液：称取3.8g四硼酸钠(4.4),用水溶解并定容至100mL。

4.152mol/L盐酸溶液：将1体积浓盐酸(4.9)溶解在5体积水中。

4.16提取溶液：取25mL甲醇(4.1)加入25mL乙腈(4.2)和50mL水。

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4.17乙腈+水：取5mL乙腈(4.2)加入5mL水。

4.18磷酸盐缓冲液(PBS):将8.0g氯化钠(4.5)、1.2g磷酸氢二钠(4.6)、0.2g磷酸二氢钾(4.7)、0.2g氯化钾(4.8)溶解于990mL水中，用2mol/L盐酸溶液(4.15)调节pH值为7.0,最后定容为1L。

4.19乙酸+水：2mL的乙酸加入到98mL水中。

4.20OPA衍生液：将40mgOPA(4.11)溶解在1mL甲醇中，用0.1mol/LNa2B407溶液(4.14)5mL稀释。加2-硫基乙醇(MCE)(4.12)50μL,混匀，过0.22μm孔径有机相滤膜，装于具塞棕色瓶中，室温避光处可以储藏1周。

4.21伏马毒素B1和B2标准品：晶体，纯度95%。

4.22伏马毒素标准储备液：准确称取适量伏马毒素B1和B2标准品(4.21),用乙腈+水(4.17)溶解，配制成伏马毒素B1浓度为100μg/mL、伏马毒素B2浓度为50μg/mL的混合标准溶液。该标准溶液在4℃下，可以稳定储藏6个月。移取500μL该混合标准溶液于5mL的容量瓶中，用乙腈+水(4.17)定容至刻度，摇匀，即可获得伏马毒素B1浓度为10ng/μL、伏马毒素B2浓度为5ng/μL的储备液。

4.23伏马毒素标准工作溶液：分别取上述伏马毒素储备液(4.22)125μL、250μL、500μL、1000μL和2500μ