羊肉中磺胺类药物残留量的测定胶体金免疫层析法.docVIP

羊肉中磺胺类药物残留量的测定胶体金免疫层析法

范围

本标准规定了羊肉中磺胺类药物残留量的测定胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器与设备、分析步骤、结果判断、性能指标及阳性结果确证。

本标准适用于羊肉中磺胺类药物残留量的快速筛检，本方法磺胺类药物的检出限为50μg/kg。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB29694-2013食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

原理

本法应用竞争抑制免疫层析原理。样品溶液中的磺胺类药物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上抗原的结合。当样品中的磺胺类药物含量超过本方法检出限时，检测线（T线）较控制线（C线）浅甚至无显色，判定为阳性；反之，当样品中的磺胺类药物含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线显色与控制线相近或偏深，判定为阴性。

总体要求

除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，用水应符合GB/T6682规定的二级水。

浓盐酸，浓度大于37%。

磷酸氢二钠。

磷酸二氢钾。

氯化钠。

氯化钾。

乙酸乙酯:色谱纯。

正已烷:色谱纯。

乙腈：色谱纯。

1mol/L盐酸溶液:量取8.6mL浓盐酸（4.1），加蒸馏水定容至100mL，室温保存。

0.01mo1/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：溶解8.0g氯化钠（4.4）、0.2g氯化钾（4.5）、1.44g磷酸氢二钠（4.2）、0.24g磷酸二氢钾（4.3）、于800mL水中溶解，并用水定容至1000mL，用盐酸溶液(4，10)调pH至7.4，经121℃高压灭菌15min，4℃下避光保存。

磺胺类药物标准储备液（100mg/mL）:准确称取磺胺类药物各10mg用乙腈溶解，定容至100mL，配置成浓度100mg/mL的磺胺类药物标准储备液，-20℃冰箱中保存，有效期6个月。

磺胺类药物标准工作液（1mg/L）:分别准确移取标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度。4℃冷藏避光保存，有效期3个月。

仪器与设备

电子天平:感量分别为0.01g与0.0001mg。

均质机:转速不小于8000r/min。

离心机:转速不小于4000r/min。

氮吹仪:加热温度不小于60℃。

移液枪:1μL~10μL，10μL~100μL，100μL~1000μL。

高压灭菌锅。

计时器。

检测步骤

试样制备

取肌肉部分，剪碎，用均质机均质，-18℃保存，试样量不少于50g。

称取

称取2g±0.05g均质后样品于10mL离心管中，加入2mL乙酸乙酯(4.6)，使用涡旋仪涡旋2min，室温(20℃±5℃)下4000r/min离心5min;移取2mL上清液于另一5mL试管中，60℃孵育至近干:向试管中依次加入0.5mL正已烷(4.7)和0.5mL；磷酸盐缓冲液(4.11)，充分混匀。静置2min待检。

测定

所有操作需在室温下(20℃+5℃)进行，取出磺胺类类胶体金免疫层析检测试剂板,吸取6.2中待测液120μL于加样孔中,反应8min后读取结果。

质控试验

空白对照:以磷酸盐缓冲液(4.11)代替6.2中待测液按6.3进行测定。

加标质控样:准确称取不含磺胺类药物的均质羊肉作为质控样，称取两份平行样，其中一份作为阴性质控样，另一份添加磺胺类药物标准溶液使其终浓度均为50μg/kg，作为阳性质控样。

结果分析

结果判定

有效性判定

空白对照组的控制线（C线）未显示红色条带，表明检测试剂板失效，无法进行检测（参见图1，分图a）。空白对照组的控制线（C线）和检测线（T线）均显示红色条带，且T线颜色与C线相同或更深，说明检测试剂板有效，可以进行检测。

阴性结果的判定

待测样本的检测线（T线）出现红色条带，且其颜色与控制线（C线）相同或更深（参见图1，分图b），结果判定为阴性。

阳性结果的判定

待测样本的检测线（T线）出现红色条带，但颜色比控制线（C线）浅，或检测线（T线）未显示红色条带（参见图1，分图c），结果判定为阳性。

质控试验的要求

空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控试验要求，此批样品结果无效。

结果判定图

总体要求

检出限:磺胺类药物检出限为2.0μg/kg。

灵敏度:灵敏度应≥95%。

特异性:特异性应≥95%。

假阳性率:假阳性率应≤5%。

假阴性率:假阴性率应≤1%

性能指标计算方