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THUNDERTM TR-FRET开启药物研发新篇章.pdf

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THUNDERTMTR-FRET开启药物研发新篇章

时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)是一种基于荧光共振能量转移(FRET,FluorescenceResonanceEnergyTransfer)和时间分辨荧光(TRF,

Time-ResolvedFluorescence)的技术,作为一种方便灵活的均相检测技术,TR-FRET现今已成为生命科学基础研究和药物研发中最为常用的检测方法之一。

TM

THUNDERTR-FRET由加拿大Bioauxilium公司研发,THUNDER™产品均提供全面验证数据。其产品线聚焦于细胞水平的检测,如细胞信号通路相关的细胞

因子,磷酸化蛋白,总蛋白,GPCR相关第二信使cAMP检测等,也涉及适合方法学开发的工具抗体。

图1:THUNDERTMTR-FRET技术原理图

Bioauxilium简介:一家总部位于加拿大蒙特利尔的专业研发和生产TR-FRET技术试剂公司,其研发人员在TR-FRET技术领域深耕30余年。Bioauxilium在

全球拥有诸多大型药物研发公司和CRO的用户,THUNDER™产品的卓越性能已经广泛得到TR-FRET用户的好评和青睐。优宁维是Bioauxilium在中国区的

授权代理商,为中国用户提供顶级性能的THUNDER™产品,高效便捷的技术支持,快速响应的物流和库存,以及灵活可控的价格方案。

一、荧光共振能量转移(FRET)

利用两种荧光基团能量转移,分别是能量供体EuropiumChelate(Donor)和能量受体Far-reddye(Accpeptor)。当供体和受体相互靠近(1-10nm),

320/340nm光激发Europium,光子能从供体转移到受体上(615nm),受体发出荧光(665nm)。

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图2:FRET技术原理图

二、时间分辨荧光(TRF)

利用镧系元素(Eu)的独特性质,其荧光半衰期长达ms级别。延迟50~100μs开始读值后,未结合的受体荧光和背景荧光均已淬灭,即反映样本真实情况。

图3:TRF技术原理图

三、THUNDERTMTR-FRET技术优势

①操作简单、快速

均相检测技术:无需洗板和包被,只需两步加样→检测,1-2h快速检测。

②反复读板,信号稳定

实验体系可支持反复读值,过夜、48h后读值亦可,如:1h,2h,4h,18h...适合预实验摸索实验条件。

③节省样本:

实验体系为20μl,样本仅需15μl。

④高通量,兼容性强:

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耗材:兼容94孔,384孔和1536孔微孔板,推荐使用潜孔板以获得最佳窗口;

仪器:现售酶标仪,安装有TR-FRET技术模块均可检测。

⑤严格验证和筛选:

最优的抗体对组合:全部抗体均从5~20对配对抗体中进行筛选后,进行专业严格验证,以确定最终的抗体对。

最大窗口:优化供体、受体浓度得到最佳信噪比(S/B)。

提供最适配的缓冲液和裂解液。

四、THUNDERTMTR-FRET细胞因子检测试剂盒

THUNDER检测细胞因子采用经典双抗夹心模型,抗体结合抗原后,用320/340nm光激发供体Eu,产生荧光共振能量转移(FRET)后,进而激发受体产生

665nm信号。信号强度与细胞因子浓度成正比。

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