细胞工程理论初级基础.pptVIP

核型变化01永生化和恶变02细胞性别03（四）、体外培养细胞的遗传学特征、体外培养细胞的生存环境无污染环境温度气体环境和氢离子浓度01.02.03.04.、体外培养细胞生存所需基本物质01糖02氨基酸03维生素04促生长因子05其它物质06细胞深低温保存的基本原理是：01在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。02细胞低温保存的关键：03在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。04（七）细胞冻存和复苏80℃16-18小时(或隔夜)20℃30分钟℃10分钟液氮罐长期储存。慢冻程序冻存和复苏的原则：慢冻快融冻存管

2ml2ml，5ml液氮罐从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38℃水浴中，使其融化（1分钟左右）；低速离心10分钟；5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上；去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。1234细胞复苏方法10%DMSO（或10％甘油）冻存液：常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂。DMSO液用培养液配好，避免因临时配制产热而伤害细胞。含20%血清培养基在细胞冻存时加入低温保护剂，能大大提高冻存效果。也有用甘油的低温保护剂的应用冷冻管内细胞数目一般为1×106cells/ml融合瘤细胞则以5×106cells/ml为宜。0102细胞欲冷冻保存时，细胞浓度应该多少？细胞的运输技术细胞污染的种类:细菌、酵母菌、霉菌和病毒污染源:无菌操作技术不当;操作室环境不佳;污染之血清;污染之细胞.（八）细胞培养的污染和检测细菌培养液被洋葱佰克霍尔德菌污染了。洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌。白色念珠菌污染真菌感染支原体污染电镜照片,煎蛋状和其他形状细菌和真菌的污染和检测肉眼直接观察法培养检查法显微镜观察法二、培养细胞形态分类粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。01悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。02绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。03按生长方式:2型体外细胞培养物的生长类型体外培养细胞的分型粘附:是大多数有机体细胞在体内1生存和生长发育的基本存在方式2含义两方面3结果基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，4有机体的绝大多数细胞必须5粘附于一固相表面6才能生存和生长。7贴附(粘附)型细胞培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。01粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞02类型细胞在体内、外的粘附方式：存在差异体内：粘附是全方位外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面外形一般与体内时明显不同按照培养细胞粘附生长时的主要形态，可分为几大类型0102030405分类根据形态大致的不同，主要2类：上皮细胞型成纤维细胞型其它，不定型名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于--01如：皮肤及其衍生物03形态：类似体内的上皮细胞05来源：来源于外胚层，内胚层细胞02消化道，乳腺，肺泡上皮性肿瘤04扁平，不规则多角形，中有圆形核06上皮细胞型体外培养细胞类型（1）——上皮细胞型02生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层------

铺石状生长时呈膜状移动很少脱离细胞群而单个活动01名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的01来源：由中胚层间充质组织起源的组织02如：真正的成纤维细胞03心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮04形态：似体内成纤维细胞的形态05胞体梭形或不规则三角形06胞质向外伸出2—3个长短不等的突起07中有卵圆形核08成纤维细胞型生长特点：排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起体外培养细胞类型（2）——成纤维细胞型与体内同名的细胞不完全相同如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但

发展趋向不同培养细胞的形态不稳定条件改变，细胞形态可有变化贴附生长型--类型培养细胞形