DB32T 3115-2016 菊花脱毒种苗生产技术规程　　.docxVIP

ICS65.020.20B05

备案号：51460-2016DB32

江苏省地方标准

DB32/T3115-2016

菊花脱毒种苗生产技术规程

Technologyofvirus-freechrysanthemumstockproduce

2016-09-20发布2016-11-20实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T3115-2016

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3待脱毒材料 1

4脱毒处理 1

5病毒检测 2

6脱毒原种苗的保存、扩繁与炼苗移栽 2

7脱毒原种苗的生物性状观察 3

8脱毒原种苗的繁殖 3

9建立脱毒苗母本圃 3

10脱毒种苗的质量检测 3

11包装与贮运 3

附录A（规范性附录）RNA病毒的反转录——聚合酶链式反应（RT-PCR）检测法 5

DB32/T3115-2016

II

前言

本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》组织编制。

本标准由南京农业大学提出并归口。本标准起草单位：南京农业大学。

本标准主要起草人：陈素梅、管志勇、吴丹、张飞、房伟民、蒋甲福、陈发棣。

DB32/T3115-2016

1

菊花脱毒种苗生产技术规程

1范围

本标准规定了菊花脱毒种苗生产技术要求和规程.本标准适用于常见菊花脱毒种苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

NY/T1591-2008菊花切花种苗等级规格

DB32/T1530-2009切花菊种苗生产技术规程

3待脱毒材料

凡有待进行脱毒处理的品种均应是通过合法途径引进的，签署有关品种权保护协议，或者经自主选育的、具有知识产权的品种。

4脱毒处理

4.1茎尖培养脱毒

4.1.1无菌苗再生体系的建立

经检测含有特定病毒的菊花，取其越冬脚芽，进行外植体表面灭菌，具体步骤如下：剪除茎段上的叶片，用流动的蒸馏水冲洗15分钟后，用滤纸吸干后，于超净工作台上用75%酒精浸泡30s，再转移到0.1%升汞中洗涤3～5min，取出，用无菌水冲洗5～6次，每次不少于3min，经消毒灭菌后的菊花茎段剪成小段，每段长2-3cm，带有1～2腋芽，接种于MS培养基中，每个组培瓶1～2个茎段。

4.1.2剥取茎尖

在超净工作台上操作，于解剖镜下，将材料置于消毒的滤纸上，用经消毒的手术刀和解剖针逐步剥去外层叶片，切取0.5～1.0mm直径大小的带有1～2片叶原基的茎尖顶端组织。

4.1.3分化培养

将剥取的茎尖接种于经过高温湿热灭菌的分化培养基上，并对接种的茎尖分别编号，置于25℃、光照强度1500～3000lx、光照时间16h/天的条件下培养，2～3个月后可分化出新芽。

DB32/T3115-2016

2

4.1.4诱导生根

切取1～2cm分化出的新芽接入生根培养基中，在25℃和光照强度1500～3000lx条件下，培养15~20d可长出新根。对每株生根苗进行编号。

4.2热处理结合茎尖培养脱毒

4.2.1热处理方法

将待脱毒的菊花植株放入光照培养箱中，采用变温升温的方式进行热处理，在日温/夜温分别为26℃/20℃下培养2d，而后每两天昼/夜温度分别升高2℃,直至38℃/30℃,该温度下培养40d。光照时间16h/天，光强为2000lx。剥取热处理过程长出的新梢顶端0.3～0.5mm的茎尖进行组织培养。

4.2.2热处理茎尖培养脱毒

按照4.1茎尖培养脱毒方法进行培养，分化出苗、转接生根，对每株生根苗进行编号。

5病毒检测

5.1主要病毒种类

菊花B病毒

ChrysanthemumvirusB

（CVB)

番茄不孕病毒

Tomatoaspermyvirus

（TAV)

番茄斑萎病毒

Tomatospottedwiltvirus

（TSWV)

黄瓜花叶病毒

Cucumbermosaiccucumovirus

（CMV)

菊花矮化类病毒

Chrysanthemumstuntviroid

（CS