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*限制性核酸内切酶演讲者：王凯II型限制酶限制酶的定义限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。限制酶在基因工程中广为使用。限制性核酸内切酶分布极广，几乎在所有细菌的属、种中都发现至少一种限制性内切酶。细菌通过自身的限制酶，破坏入侵的外源DNA，从而保护自身。”30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种“限制”病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoRI和EcoRII，以及来源于流感嗜血杆菌（Haemophilusinfluenzae）的HindII和HindIII。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。1限制酶的发现2命名EcoRIEscherichia属名Ry13Coli种名株系编号切割频率切割频率是指某限制性核酸内切酶在DNA分子中预期的切割概率。可以估算该限制性核酸内切酶在某种DNA分子中的切点数。前提是：假定DNA的碱基组成是均一的、碱基排列在DNA分子上是随机分布的。这样每个位点上，每一种碱基出现的概率即为1/4。如果某限制性核酸内切酶的识别序列是6bp，则其切割频率为(1/4)6=1/4096，即每隔4.1kb就可能有一个切割点。当识别序列为n个bp，则其切割频率为（1/4）n。限制酶的种类I型限制酶通常其切割位点与识别位点相距千个碱基,不能准确定位切割位点。例如：EcoB、EcoK。II型限制酶所识别的序列多为短的回文序列，切割位点与识别位点一致。是基因工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、HindIII。III型限制酶切割位点与识别位点相距24-26个碱基，不能准确定位切割位点。例如：EcoPI、HinfIII。GAATATTCCTTATAAG什么是回文序列？GAATTAAGCTTAATTCII型限制酶ApaI??识别序列：5GGGCC^C3BamHI识别序列：?5G^GATCC3BglII??识别序列：5A^GATCT3EcoRI??识别序列：5G^AATTC3HindIII?识别序列：5A^AGCTT3KpnI??识别序列：5GGTAC^C3NcoI??识别序列：5C^CATGG3NdeI???识别序列：5CA^TATG3NheI???识别序列：5G^CTAGC3NotI???识别序列：5GC^GGCCGC3SacI???识别序列：5GAGCT^C3SalI???识别序列：5G^TCGAC3?SphI???识别序列：5GCATG^C3XbaI???识别序列：5T^CTAGA3XhoI?识别序列：5C^TCGAG3?粘性末端和平末端II型限制酶切割DNA后形成粘性末端或平末端分别由错位切和平切形成。能形成粘性末端的酶在基因工程中应用最多。5’NNNGTTAACNNN3’3‘NNNCAATTGNNN5’?5’NNNGCGGCCGCNNN3‘3’NNNCGCCGGCGNNN5‘?HaeⅠ的识别序列NotⅠ的识别序列5’粘性末端和3’粘性末端?5’NNNGC-OHP-GGCCGCNNN3‘3’NNNCGCCGG-PHO-CGNNN5‘?5’粘性末端3’粘性末端??5’NNG
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