《液相色谱实用技术》课程教学大纲.pptxVIP

《液相色谱实用技术》课程教学大纲汇报人：XXX2025-X-X

目录1.液相色谱基本原理

2.液相色谱仪的结构与功能

3.液相色谱的分离条件优化

4.液相色谱的应用

5.液相色谱数据处理与分析

6.液相色谱常见问题与解决方法

7.液相色谱的新技术与发展趋势

01液相色谱基本原理

液相色谱法的分类经典液相色谱采用不同极性的固定相和流动相，通过不同极性物质的相互作用实现分离。如C18柱用于非极性物质的分离，反相液相色谱（RPC）应用广泛。分离效率高，适用范围广。亲和液相色谱利用特定配体的亲和力进行分离，如亲和色谱用于生物大分子的分离，具有高度的选择性和灵敏度。分离时间短，重现性好。离子交换液相色谱基于离子交换原理进行分离，固定相表面带有电荷，根据样品离子与固定相电荷的相互作用进行分离。如阴离子交换和阳离子交换色谱，广泛应用于生物大分子和小分子化合物的分离。

液相色谱的流动相与固定相流动相选择流动相的选择对分离效果至关重要。常用溶剂包括水、乙腈、甲醇等，需根据分析物性质和色谱柱类型进行选择。例如，反相色谱中常用乙腈与水的混合溶剂，比例通常在70:30至90:10之间。固定相种类固定相是色谱分离的核心，种类繁多。C18柱是最常用的非极性固定相，具有疏水性，适用于大多数有机化合物的分离。如C18柱表面积约为5-10平方米，能提供良好的分离效果。固定相制备固定相的制备要求严格，通常采用化学键合法制备。如C18键合相是通过在硅胶表面键合C18基团制成，键合密度通常在3-10埃之间。固定相的纯度和均匀性对分离效果有直接影响。

液相色谱的分离机制吸附作用固定相对分析物的吸附作用是液相色谱分离的基本机制之一。如C18柱通过非极性相互作用吸附非极性分析物，而极性分析物则被极性固定相吸附。吸附强度与固定相的性质和流动相的组成有关。分配作用分配色谱是基于样品在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离。分析物在两相间的分配系数不同，会在流动相和固定相之间反复分配，从而实现分离。分配比与两相的极性和溶剂性质有关。离子交换作用离子交换色谱基于分析物在固定相上的电荷差异进行分离。固定相表面带有电荷，能与带相反电荷的分析物结合。离子交换能力与固定相的离子交换基团种类和浓度有关，分离效率受流动相pH和离子强度的影响。

02液相色谱仪的结构与功能

液相色谱仪的基本结构进样系统进样系统负责将样品引入色谱柱。常用的进样方式有手动进样、自动进样和高压进样。自动进样器能实现样品的自动进样，减少人为误差，提高工作效率。进样量通常在几微升到几十微升之间。色谱柱色谱柱是液相色谱仪的核心部件，用于分离分析物。色谱柱的长度一般在2-5米，内径为2-5毫米。固定相的种类和性质直接影响分离效果。色谱柱的填充颗粒大小通常在5-10微米之间。检测器检测器用于检测分析物在色谱柱中的流出物。常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、电感耦合等离子体质谱检测器等。检测器的灵敏度、选择性和线性范围对分离结果有重要影响。检测器的响应时间通常在毫秒级别。

检测器的种类与应用紫外检测器紫外检测器通过分析物对紫外光的吸收进行检测。其检测限可达纳克级别，广泛应用于药物分析、食品检测和环境监测等领域。检测波长范围通常在190-700纳米之间。荧光检测器荧光检测器利用分析物在激发光照射下产生的荧光进行检测。具有高灵敏度和选择性，适用于具有荧光性质的分析物检测。检测限可达皮克级别，常用于生物大分子分析。质谱检测器质谱检测器通过分析物在电场和磁场中的质荷比进行检测。具有高灵敏度和高选择性，适用于复杂混合物的分析。检测限可达阿摩尼级别，广泛应用于代谢组学和蛋白质组学等研究领域。

流动相制备系统溶剂过滤器溶剂过滤器用于去除流动相中的杂质，如微粒、气体和有机溶剂。通常使用0.22微米的滤膜，确保流动相的纯度。过滤器更换周期根据使用频率和溶剂质量而定。脱气系统脱气系统用于去除流动相中的溶解气体，以防止气泡产生和峰形畸变。常用的脱气方法包括超声波脱气和真空脱气。脱气效率通常在99%以上，保证分离效果。梯度洗脱系统梯度洗脱系统用于调节流动相的组成，实现分析物在不同保留时间点的有效分离。系统通常包括比例阀和泵，能精确控制流动相的组成和流速。梯度洗脱范围可达100:1甚至更高。

03液相色谱的分离条件优化

流动相的选择溶剂极性流动相的极性直接影响分离效果。水是常用的极性溶剂，而乙腈、甲醇等则是非极性溶剂。根据分析物极性和色谱柱性质选择合适的溶剂，如C18柱适合用非极性溶剂进行反相液相色谱。pH值调整流动相的pH值对某些分析物的保留和稳定性有重要影响。通过添加酸或碱调整pH值，有助于改善峰形和分离度。通常pH值调整范围为2-12，需根据分析物特性进行优化。有机溶剂比例流动相中有机溶剂与水的比例（即流动相组成）影响分离效果