酶的化学修饰.ppt

肝素的碳二亚胺法修饰第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日5．血浆蛋白质血浆蛋白质是血浆中的天然组分，它们与外源蛋白质（包括酶）的复合物在血液中有可能被视为“自体蛋白”而被接受，同时由于血浆蛋白质具有较大的分子量，在改进酶的性质方面效果更明显。因此，已被认为是具有较大优越性和发展前途的修饰剂。其中人血清白蛋白是研究较多的一种酶修饰剂。第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日血浆蛋白质修饰法（1）戊二醛法第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日血浆蛋白质修饰法（2）活性酯法白蛋白的活性酯修饰法反应条件温和，避免了活泼的双功能交联剂直接与酶接触所产生的酶失活，减少了副反应的发生。用活性酯法以白蛋白修饰尿激酶，在不用底物保护酶活性部位的条件下，酶活回收率仍高达90％以上，结合率高达80％以上。白蛋白的琥珀酰化应在碱性条件下进行，与对硝基苯酚的反应要在偏酸性pH下进行。第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日白蛋白活性酯法修饰第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日6．琥珀酸酐从大肠杆菌得到的L-天冬酰胺酶由四个亚基组成，当用琥珀酸酐在碱性条件下修饰酶的赖氨酸残基时，不同的反应条件得到了不同的结果。当酶分子中15～25％的赖氨酸被修饰后，酶活性有所提高，当40％的赖氨酸被修饰后，酶仍保留了全部活性，因此可以认为这部分基团与酶活性关系不大。随着修饰程度的增加，大量带正电荷的氨基被带负电荷的羧基侧链取代后，所产生的静电斥力就可能导致酶亚基的解离和分子内部的氨基被修饰，从而使酶活性降低。第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日L-天冬酰胺酶琥珀酰化修饰程度与酶活性的关系琥珀酸酐／LYS0.250.501.02.03.04.06.08.0琥珀酰化LYS／总LYS0.150.220.400.500.570.650.820.93酶活性／对照酶活性1.161.251.000.720.600.500.100第37页，共53页，星期日，2025年，2月5日7．金属离子置换把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的功能和特性发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。通过金属离子置换修饰，可以了解各种金属离子在酶催化过程中的作用，有利于阐明酶的催化作用机制，并有可能提高酶活性，增强酶的稳定性，甚至改变酶的某些动力学性质。第38页，共53页，星期日，2025年，2月5日关于酶的化学修饰第1页，共53页，星期日，2025年，2月5日一、为什么要对酶进行化学修饰虽然酶催化化学反应有专一性强、效率高、条件温和等优点，但也有一些严重的缺点，正是这些缺点使得酶的应用受到很大的限制，酶的用途还不够广泛，大规模使用酶的工业生产还很少。第2页，共53页，星期日，2025年，2月5日酶应用的缺点a.稳定性：酶是由细胞产生的生物活性大分子，一旦离开细胞这个特殊的环境，常常显得不够稳定，容易变性失活。b.催化反应时的条件：一般酶反应是在pH基本接近中性，温度接近室温的水溶液中进行的。但在工业应用上，由于底物和产物带来的影响，反应时的pH常常不在中性范围内。温度升高有利于提高反应速度，但酶失活也加快。当底物不溶于水时，酶难以发挥作用。第3页，共53页，星期日，2025年，2月5日酶应用的缺点c.酶的主要动力学性质不适应：米氏常数(Km)值过大时，反应不能在低底物浓度下高速进行。由于人体内各种代谢物质的浓度通常较低，Km值过大的酶用于临床检测和治疗时，往往不能得到良好的效果。有些底物或产物对酶活性有抑制作用，也会影响酶反应的速度。第4页，共53页，星期日，2025年，2月5日酶应用的缺点d.临床应用的特殊要求：当前临床应用的大多数酶来自动物、植物和微生物，对人体来说这些酶都是外源蛋白质，它们具有抗原性，有可能引起人体的过敏反应。这不但影响临床上的连续使用，还可能导致生命危险。另外，酶进入人体后也常会因一些蛋白酶、抑制剂或抗体的作用而失去活性，特别是当酶进入人体后不能迅速到达或集中于病灶时，这种情况尤为明显。第5页，共53页，星期日，2025年，2月5日酶改造的两个水平基因水平：有目的的改变基因中的核苷酸顺序，从而改变酶的氨基酸顺序，以期获得化学结构更为合理的酶蛋白。这是蛋白质工程的研究内容。蛋白质水平：人们用化学法或酶法对已合成的酶的结构进行改造，一方面是切除部分肽链和置换某些氨基酸，另一方面是使酶分子中的某些氨基酸残基与一些化学试剂反应，加上一些特定的基团，即酶的化学修饰。由于后一方面技术较为简单，容易见效，所以这方面的工作做得最多。