间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病.pptVIP

AB敏感性高，特异性强，能区别不同感染度，能区别现在感染还是过去感染，价廉。A但目前还没有，今后可能依靠杂交瘤技术、DNA技术而获得理想的抗原。B理想抗原取人“O”型血红细胞3份（不同个体）混合，用生理盐水洗涤。置冰浴内，将戊二醛溶液慢慢滴入红细胞悬液中，边加边摇，醛化1h。用1/10000的柳硫汞蒸馏水配成10%的红细胞悬液，置于4℃备用。红细胞醛化12醛化红细胞优点克服了个体差异，保证实验重复性避免操作过程中因振荡、低渗、冻融使红细胞破裂、溶血延长红细胞的保存时间，在4℃可保存1年取1/10000鞣酸溶液与等量2.5%红细胞悬液混匀，置于37℃中15min，并不断摇动。洗涤，去除多余的鞣酸。红细胞鞣化鞣化红细胞的优点鞣化后红细胞易吸附蛋白抗原。取虫卵抗原原液1:100稀释，与2.5%的鞣化红细胞等量混合，置于37℃水浴中30min，并不断摇动，然后离心，洗涤，去除多余抗原。用含有5%蔗糖及1%正常兔血清（56℃灭活）的pH7.2PBS保护液，配成10%浓度的致敏红细胞悬液。致敏效果与抗原的活性及纯度有关。1红细胞致敏2将上述致敏红细胞悬液摇匀，分装于2ml安瓿内。每支0.4ml，立即放入-40℃冰箱冰冻，待全部分装完毕后，移入冰冻干燥机内，冰冻干燥约24h，干燥后封口，保存于4℃中备用。冰冻干燥具有高科技含量不是单纯干燥，在冰冻状态下使水分子升华，不使红细胞破裂，不影响抗原活性。致敏红细胞的冰冻干燥12操作步骤01取生理盐水2ml，加入装有冰冻干燥红细胞的安瓿中，配成2.0%的红细胞悬液，摇匀。在“V”型微量血凝反应板的第1孔中加生理盐水100μl,第2、3孔中各加25μl。02第1孔中加待检血清25μl，混匀后吸出25μl加于第2孔中，在第2孔中混匀后，吸出25μl加于第3孔中，混匀后弃去25μl。此时第1、2、3孔中的血清稀释度依次为1:5、1:10、1:20。在第2、第3孔中各加致敏红细胞悬液25μl，将反应板放在振荡器上振荡1min，室温下静置45min，观察反应结果。间接红细胞凝集试验诊断血吸虫病间接红细胞凝集试验

（Indirecthaemagglutinationtest,IHA）以红细胞为载体吸附预先制备的特异性抗原或抗体作为试剂检测标本中的相应抗体或抗原血清学方法特点：抗原与其抗体之间的特异性反应红细胞凝集现象12345国外最早于1955年应用于检测马抗血清010203国内陶义训等（1958）首先应用于诊断日本血吸虫病杨赞元等（1976）应用冰冻干燥方法制备试剂是指细菌、细胞等颗粒性抗原加入相应抗体，并在适量电解质存在的条件下，两者特异性结合且进一步凝聚成肉眼可见的小块。1凝集反应分为直接凝集和间接凝集反应。2（一）凝集反应一、基本概念绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2～3天致敏前将红细胞醛化，可长期保存而不溶血常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛载体颗粒原理日本血吸虫可溶性虫卵抗原（二）间接红细胞凝集试验IHA：用抗原致敏红细胞检测标本中抗体1反向间接血凝试验：用特异性抗体致敏红细胞检测标本中的相应抗原2间接血凝抑制试验3反向间接血凝抑制试验4（三）间接血凝的类型（正向）间接凝集反应反向间接凝集反应间接凝集抑制反应（一）血吸虫虫卵抗原制备分离虫卵→脱水、脱酯干燥→研磨成细粉→冻融→超声粉碎→普通离心→高速离心。经离心后的上清液，即为虫卵抗原原液，保存于-20℃中备用。二、冻干致敏红细胞的制备