DL;神经胶质瘤细胞;抗肿瘤;趋化.docx

沈阳药科大学硕士学位论文实验结果

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Fig.9PhotomicrographobservationsinculturedU251cells.CellsweretreatedwithDLat(A)0μg/mL,(B)30

μg/mL,(C)60μg/mL,and(D)100μg/mLfor24h.Magnification,×200.

2.5DL对C6细胞形态的影响

为了考察DL对C6细胞的形态学影响，选取对数生长期人胶质瘤细胞株C6,以每孔2000μL,5×10?个/mL种植于6孔培养板中，孵育24h。分设空白组，给药组。作用24h后，倒置光镜下观察、拍照。实验结果显示，DL作用C6细胞24h,空白对照组细胞生长正常，加药24h后细胞明显变圆，细胞质出现大小不一的空泡；在高浓度(100μg/mL)时，这些空泡互相融合，形成一个空的胞质内大泡(Fig.10)。

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Fig.10PhotomicrographobservationsinculturedC6cells.CellsweretreatedwithDLat(A)0μg/mL,(B)30

μg/mL,(C)60μg/mL.and(D)100μg/mLfor24h.Magnification,×200.

3.DL诱导人恶性胶质瘤细胞U87的死亡方式初探

3.1倒置显微镜下观察DL对U87细胞形态学影响

如图Fig.6所示，DL作用U87细胞24h后，细胞膜完整，细胞明显变圆，细胞质几乎完全被大大小小的空泡所占据；在高浓度(100μg/mL)时，这些空泡互相融合，形成一个空的胞质内大泡。细胞并未出现凋亡的典型形态特征，如：细胞皱缩和凋亡小体等。

3.2荧光显微镜下吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色法观察DL对U87细胞形态学影响

将消毒过的盖玻片预先置入6孔板，以10×10?个/mL种入细胞，常规培养24h,经不同浓度药物作用24h后，加入终浓度为40μg/mL的AO/EB染液染色1min;荧光显微镜下观察、拍照。实验结果显示，正常组细胞生长正常，DL处理后细胞明显变圆，胞内出现许多大大小小的空泡，细胞膜保持完整，无凋亡小体的出现(Fig.11)。

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Fig.11EffectofDLonthemicroscopyobservationchangesinU87cells.Cellsweretreatedwith(A)0μg/mL,(B)30μg/mL,(C)60μg/mLand(D)100μg/mLDLfor24h,AOEBstainingwasperformed.Magnification,×200.AOistakenupbybothviableandnonviablecellsandemitsgreenfluorescenceifintercalatedintoDNA.EBistakenuponlybynonviablecellsandemitsredfluorescencebyintercalationintoDNA.Resultsarefromasingleexperiment,similarresultswereobtainedinthreeseparateexperiments.

3.3DL对U87细胞周期的影响

为了考察DL对U87细胞的周期阻滞作用，选取对数生长期U87细胞传代至100mL培养瓶中，待细胞铺满瓶底面积70~80%时换新鲜培养液，加药分别设以下组别：空白对照组、DL30、60μg/mL组，培养箱中继续孵育24h,然后收