生物基因工程知识点总结.pptx

生物基因工程知识点总结

目录CONTENTS基因工程基本概念与原理基因克隆与载体构建基因组编辑技术与应用转基因生物安全与伦理问题基因治疗前沿进展及挑战合成生物学在基因工程领域应用

01基因工程基本概念与原理

基因工程定义发展历程基因工程定义及发展历程基因工程自20世纪70年代诞生以来，经历了数十年的发展，逐渐形成了包括基因克隆、基因体外表达、基因敲除、基因编辑等在内的多种技术体系。基因工程是指通过人工手段，在实验室里对生物的遗传物质--DNA分子进行操作，改变其结构和功能，进而创造出符合人们需要的新品种或新产品。

基因操作基本步骤基因操作主要包括目的基因的获取、基因载体的选择、基因体外重组、重组DNA导入受体细胞以及目的基因的检测与鉴定等步骤。基因操作技术常用的基因操作技术包括PCR技术、限制性核酸内切酶切割DNA、DNA连接酶连接DNA片段、基因枪和显微注射技术等。基因操作基本步骤与技术

重组DNA技术是指将不同来源的DNA分子在体外进行人工剪切和拼接，形成重组DNA分子，然后将其导入到受体细胞中，使外源基因在受体细胞内复制和表达。重组DNA技术原理重组DNA技术广泛应用于农业、医药、工业等领域。例如，通过基因工程改良作物品种，提高农作物产量和品质；利用工程菌生产高附加值的生物制品，如胰岛素、干扰素等；在基因治疗方面，通过导入外源基因来修复或替代缺陷基因，达到治疗疾病的目的。重组DNA技术应用重组DNA技术原理及应用

基因表达调控定义基因表达调控是指生物体内基因表达的开启、关闭、增强或减弱等过程，这些过程受到多种因素的调节和控制。基因表达调控机制基因表达调控机制包括转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控和翻译后水平调控等多个层面。其中，转录水平调控是最主要的调控方式，包括启动子、增强子、沉默子等顺式作用元件和反式作用因子的相互作用来调控基因的转录过程。基因表达调控机制

02基因克隆与载体构建

同源克隆策略异源克隆策略定向克隆策略基因克隆策略选择利用已知基因序列设计引物，从基因组或cDNA文库中扩增目的基因。从不同物种或基因文库中筛选和克隆目的基因，需要考虑密码子优化和表达调控等问题。通过酶切连接、同源重组等方法将目的基因定向插入到载体中。

123噬菌体载体质粒载体病毒载体载体类型、特点及构建方法具有自主复制能力的小型环状DNA分子，可容纳外源基因并稳定遗传给后代细胞。构建方法包括酶切连接、同源重组等。利用噬菌体感染宿主细胞并整合到宿主基因组中，可实现外源基因的高效表达。构建方法涉及噬菌体包装和感染等步骤。利用病毒对宿主细胞的感染能力，将外源基因导入到细胞中并实现高效表达。构建方法包括病毒包装、转导和感染等。CR扩增技术cDNA文库筛选技术基因组文库筛选技术目的基因鉴定技术目的基因获取与鉴定技术利用特异性引物对目的基因进行体外扩增，可获得大量纯化的目的基因片段。从特定组织或细胞的cDNA文库中筛选和克隆目的基因，适用于未知基因序列的克隆。从基因组文库中筛选和克隆目的基因，需要考虑内含子、启动子等调控序列的影响。包括测序分析、限制性酶切图谱分析等方法，用于验证目的基因的正确性和完整性。性标记筛选分子杂交筛选PCR鉴定技术测序鉴定技术重组子筛选与鉴定方法利用载体上的抗性基因标记，通过抗生素筛选获得含有目的基因的重组子。利用特异性探针与目的基因进行杂交，从大量克隆中筛选出含有目的基因的重组子。对重组子进行测序分析，验证目的基因的正确性和完整性，同时确定插入位点和方向等信息。利用特异性引物对重组子进行PCR扩增，通过电泳分析鉴定目的基因是否成功插入到载体中。

03基因组编辑技术与应用

CRISPR-Cas9系统原理CRISPR-Cas9是一种由RNA引导的DNA内切酶系统，通过特异性识别并切割目标DNA序列，实现对基因组的精确编辑。操作指南设计特异性sgRNA，构建表达载体或合成RNA，将Cas9蛋白和sgRNA导入细胞，筛选并验证编辑结果。CRISPR-Cas9系统原理及操作指南

123TALENs即转录激活因子样效应物核酸酶，通过识别特定的DNA序列并切割，实现基因敲除或敲入。TALENs技术ZFNs即锌指核酸酶，利用锌指蛋白识别特定的DNA序列，并引导核酸酶切割DNA，从而实现基因编辑。ZFNs技术TALENs和ZFNs在基因编辑方面具有较高的特异性和效率，但TALENs在构建和筛选方面具有更高的灵活性和易用性。技术比较TALENs和ZFNs技术比较

遗传性疾病治疗通过基因组编辑技术修复或替换突变基因，治疗遗传性疾病如囊性纤维化、杜氏肌营养不良症等。感染性疾病治疗利用基因组编辑技术破坏或抑制病原体基因，治疗感染性疾病如艾滋病、乙肝等。肿瘤治疗通过基因组编辑技术敲除或抑制肿瘤相关基因，激