DNA的复制精品课件.pptVIP

5．拓撲異構酶除去DNA解旋時產生的超螺旋三、Terminationandsegregation細菌基因組的複製是從單一位點雙向進行的。大腸桿菌的複製終止區域位於環狀染色體上與複製起點相對的一側。在這一區域存在若干個終止位點（Ter）。Ter序列按照特定的方向排列在染色體上（圖），製造了一個“陷阱”。複製叉可以進入該區域，但不能出去，原因是Ter位點只在一個方向上發揮作用。當序列特異性DNA結合蛋白Tus與終止位點結合後，只阻斷一個方向上的複製叉的前進，而對向另一個方向前進的複製叉不起作用。例如，TerB阻斷順時針方向複製叉，TerA阻止逆時針方向複製叉。終止區這樣的安排可確保兩個從相反方向進入ter區的複製叉總能相遇，當一個複製叉遇到另一個複製叉時，DNA複製就完成了。ReplicationTerminationoftheBacterialChromosome OnesetofTersitesarrestDNAforks progressingintheclockwisedirection,a secondsetarrestsforksinthe counterclockwisedirection:ReplicationforksmeetatTersequences(tlocus)Ter(termination)sequences20bplongcoreconsensusis:5’-GTGTGTTGT-3’boundbyTusprotein(terminusutilizationsubstance)clockwiseforktrapcounterclockwiseforktrap一旦複製完成，形成兩個相互連接的子代DNA分子，它們再由拓撲異構酶IV分開。四、複製起始調控大腸桿菌染色體DNA的oriC含有11個拷貝的GATC序列。在DNA複製之前，染色體DNA上的每一GATC序列，包括oriC區域中的GATC，都被甲基化。新複製的GATC位點呈半甲基化狀態，即舊鏈是甲基化的，但新鏈尚未被甲基化。新複製、半甲基化的oriC可被SeqA蛋白識別，SeqA與半甲基化的GATC緊密結合。SeqA的結合出現了兩個結果：首先它極大地降低了與之結合的GATC序列的甲基化速率；其次阻止了DnaA蛋白與複製起點的結合。當SeqA偶爾從GATC位點上脫離時，序列即被DNA甲基轉移酶完全甲基化，防止了SeqA的重新結合。當GATC被完全甲基化之後，DnaA蛋白能進行結合並指導新一輪DNA的複製。一、複製起點與起始真核生物的DNA複製發生在S期。在真核生物的基因組中，並非所有的複製子都同時進行DNA複製,而是按一定的順序分批進行。構成常染色質的DNA在S期的早期複製，異染色質DNA主要在S期晚期複製，著絲粒DNA和端粒DNA複製時間最晚。現在尚不清楚控制複製早遲的分子機制。第四節真核生物DNA的複製在真核生物中複製起始區有沒有特殊序列呢？同研究大腸桿菌的oriC序列一樣，通過把釀酒酵母基因組DNA片斷插入到無複製功能的質粒中，找到了能夠使重組DNA分子在酵母細胞中自主複製的酵母基因組順序，這些酵母染色體的複製起點就被稱為自主複製順序（autonomouslyreplicatingsequences）或叫ARS元件。像所有的真核生物的染色體一樣，每一酵母染色體含有多個複製起點。在釀酒酵母的17個染色體中，大約有400個複製起點，其中一些已經被仔細地研究過。利用突變分析，在一個～180bp的ARS（ARS1）中鑒定出了一個複製起始必需元件，15bp的元件A，和另外三個能夠提高起始效率的短片斷，分別稱為B1、B2和B3。比較一下酵母中多種ARS元件可發現有11bp的一致順序[A/T]TTTAT[A/G]TTT[A/T]。元件A有10個位置上的堿基與一致序列相同，元件B2有9個位置上的堿基與一致序列一樣。在酵母細胞中，一個由6種不同的蛋白質構成的複合物，起始位點識別複合物（originrecognitioncomplex，ORC），專一性地與ARS1的元件A結合。這種複合體也專一性地結合於其他被研究過的ARS上。ORC與複製起點的結合很緊密，在整個細胞週期中，ORC一直保持著與ARS的結合狀態。在G1期的早期，ORC募集Cdc6和Mcm形成前複製複合體（pre-replicativecomplex，pre-RC）。在細胞週期的大部分時間，Cdc6的濃度很低，但是在G1期的早期Cdc6的濃度短暫升高，並與複製