高二年级下册学期生物人教版选修3 1.2基因工程的基本操作程序课件（共45张ppt）(含音频+视频).pptxVIP

目的基因的获取基因表达载体的构建（核心）将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序

一、目的基因的获取目的基因：1、编码蛋白质的基因2、具有调控作用的因子抗逆性相关的基因优良品质相关的的基因生物药物及保健品相关的基因毒物降解相关的基因···人们所需要转移或者改造的基因

一、目的基因的获取一、目的基因的获取获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成

一、目的基因的获取一、目的基因的获取1.从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。

一、目的基因的获取一、目的基因的获取部分基因文库：基因组文库：含有一种生物的全部基因只包含了一种生物的部分基因，如cDNA文库

与载体连接导入受体菌群DNA聚合酶与载体连接导入受体菌群用适当限制酶切割①基因组文库的构建提取某生物全部DNA许多DNA片段该生物的基因组文库②cDNA文库的构建—mRNA反转录形成mRNA逆转录酶杂交双链核酸酶H单链DNA双链DNA该生物的cDNA文库(cDNA)

一、目的基因的获取

基因组文库和部分基因文库的比较小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分可以

思考：如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：基因翻译产物蛋白质等特性基因的转录产物mRNA基因在染色体上的位置基因的功能

一、目的基因的获取一、目的基因的获取2.利用PCR技术扩增目的基因PCR——多聚酶链式反应是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。

PCR扩增仪DNA双链复制一段已知目的基因的核苷酸序列模板DNA原理：前提：原料:引物（一小段单链DNA）DNA聚合酶四种脱氧核苷酸能量热稳定（Taq酶）

以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）指数2n扩增形式在短时间内大量扩增目的基因扩增结果

过程：变性90-95℃退火55-60℃延伸70-75℃

PCR技术延伸：加热至70～75℃Taq酶以目的基因为模板，从引物开始，合成互补的新DNA链变性退火延伸变性：加热至90～95℃双链DNA解链成单链DNA退火：冷却至55～60℃引物结合到互补DNA链上

一、目的基因的获取一、目的基因的获取3.人工合成当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。通过DNA合成仪用化学方法人工合成

一、目的基因的获取一、目的基因的获取蛋白质的氨基酸顺序mRNA核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推测DNA合成仪推测合成反转录法化学合成法

一、目的基因的获取一、目的基因的获取获取目的基因的常用方法：1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成目的基因比较小，核苷酸序列又已知目的基因的核苷酸序列已知目的基因的核苷酸序列不完全已知

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建载体与表达载体有什么区别？为什么要有“表达载体的构建”这一步？

单独的DNA片段─目的基因是不能稳定遗传的。构建表达载体可以使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能表达和发挥作用。

基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶切割两个切口获得目的基因DNA连接酶连接重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建复制原点是整个载体的复制起点复制原点：

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质启动子：

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录终止子：

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来标记基因：

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心二、基因表达载体的构建启动子+目的基因+终止子+标记基因基因表达载体的组成：

目的基因进入____________内，并且在受体细胞内维持_______和________的过程，称为受体细胞稳定表达转化三、将目的基因导入受体细胞基因表达载体如何进入受体细胞内呢？

方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射技术——Ca2+处理，感受态细胞三、将目的基因导入受体细胞

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