微生物的实验室培养-医学知识.ppt

课题1微生物的实验室培养

基础知识培养基(culturemedia)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质叫做培养基。配制成液体状态的基质称为液体培养基。配制成的固体状态的基质称为固体培养基。

在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成实验室最常用的琼脂固体培养基。一般的培养基都含有水、碳源、氮源和无机盐。培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

培养基

1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组成牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000mL提供的主要营养物质碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素无机盐氢元素、氧元素

无菌技术1.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒（disinferction）。2.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌（sterilization）。3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

高压蒸汽灭菌锅干热灭菌箱

实验操作一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1计算根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100mL的培养基时，各种成分的用量。

2称量准确地称取各种成分。牛肉膏比较粘稠，可以用玻绑挑取，放在称量纸上称量。牛肉高和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。

3溶化将称好的牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加入少量的水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。往烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解。加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中，不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。当琼脂完全熔化后，补加自来水100mL。

4灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15—30min。将培养皿用几层旧报纸抱紧，5—8套培养基作一包，包好后放入干热灭菌箱内，在160—170℃下灭菌2h。

5倒平板待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。

二纯化大肠杆菌最常用的微生物接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。请你选用其中一种方法，在牛肉膏蛋白胨固体培养基上纯化大肠杆菌。

平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

结果分析与评价未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立的菌落？这些菌落的颜色、形状和大小相似吗？培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。

如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？你是如何记录实验结果的？与其他同学交流互评。

课题延伸为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏。对于频繁使用的菌株，可以才用临时包藏的方法，详细内容参考教材。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。