DB1302T 374-2013 水产品中氯霉素检测技术规范.docxVIP

B50

DB1302

唐 山 市 地 方 标 准

DB1302/T374—2013

水产品中氯霉素检测技术规范

2013-11-15发布 2013-12-15实施

唐山市质量技术监督局发布

DB1302/T374—2013

DB1302/T374—2013

前 言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由唐山市质量技术监督局提出。

本标准起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。

本标准起草人：郑百芹、蒙君丽、张建民、葛怀礼、董李学、刘洋、周鑫、吴颖、肖琎、李玉文、张荣华、牛惠超。

DB1302/T374—2013

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水产品中氯霉素检测技术规范

范围

本标准规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析测定方法、酶联免疫吸附测定方法和高效液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于水产品中氯霉素残留的快速集成检测。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单或修订版）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规则和试验方法

SC/T3016 水产品抽样方法

农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 高效液相色谱-串联质谱法农业部1025号公告-26-2008 动物源性食品中氯霉素类残留检测 酶联免疫吸附测定法

抽样方法

按照SC/T3016执行。

胶体金免疫层析法

适用范围

本方法适用于水产品中氯霉素的快速筛选检测，最低检测浓度1μg/kg。

方法原理

胶体金快速检测试纸条采用竞争抑制免疫层析原理。若样品中含有氯霉素，氯霉素与金标抗体相结合，封闭金标抗体上的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜上氯霉素偶联物结合，显色较弱或不显色；若样品中不含有氯霉素，则不能阻止金标抗体与纤维素膜上的氯霉素偶联物结合，显色较强。

试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的三级水。

吸管、缓冲液、氯霉素检测条(试剂盒自带)，4℃～30℃阴凉避光干燥处储存。

乙酸乙酯

正己烷

仪器和设备

组织匀浆机

4.4.2天平：感量（0.01g）

振荡器或混旋器

微量移液器：单道20μL～200μL、100μL～1000μL

计时器

吹风机

样品前处理

称取已均质样品1g（±0.05g）于l5mL离心管中，加入1mL乙酸乙酯，振荡器震荡混匀，静置5min；移液枪吸取澄清液(约300μL～400μL)于50mL锥底离心管中，吹风机冷风吹干；用0.3mL正己烷溶解残渣，加入0.3mL缓冲液，振荡器振荡1min，静置3min，供测试用。

检测和结果判定

检测

取出检测条，平放，用移液枪或塑料吸管取待测液80μL(2～3滴)于加样孔，10min～15min内观察结果，目测检测线。

结果判定

结果判定如图1所示。其中C线为质控线，T线为检测线。

C线和T线均呈现肉眼可见红色线为阴性。

T线无显色，C线呈现肉眼可见红色线为阳性。

C线和T线无显色或只出现T线，C线无显色的为无效。

注：检测条在打开包装1h内使用。

待测条 阴性 阳性 无效

图1检测结果判定

酶联免疫吸附法

适用范围

本方法适用于水产品中氯霉素的快速筛选检测，最低检测浓度0.25μg/kg。

方法原理

采用ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被氯霉素抗体，样品中残留的氯霉素和酶结合物竞争氯霉素抗体，TMB底物显色，样品吸光度值与含氯霉素含量负相关。通过标准曲线计算样本浓度，再乘以其对应的稀释倍数，即可得到样品中氯霉素的含量。

试剂和材料

以下所用的试剂，除特殊注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的二级水。

氯霉素酶联免疫检测试剂盒

乙酸乙酯

正己烷

复溶液（试剂盒自带）

仪器设备

微孔板酶标仪（配备450nm/630nm滤光片）

均质器

振荡器

涡旋仪

离心机（转速3000r/min）

5.4.6天平（感量0.01g）

微量移液器：单道20μL～200μL、100μL～1000μL

氮气吹干装置

样品前处理

按照农业部1025号公告-26-2008方法进行样品前处理。

样品检测

测定条件:将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20℃～25℃）平衡30min。每种液体试剂使用前均须摇匀。

编号：将氯霉素标准溶液和待测样品对应微孔按序编号，每个标准溶液和待测样品均做重复孔。

加样：加入标准溶液/样品50μL，然后每孔分别加入氯霉素酶标记物溶液50μL。