菌落数及大肠菌群测定.pdfVIP

菌落总数及大肠菌群实验检测项目

一、自来水

1、采样：打开水龙放水1-3min即可水样，采样瓶为250mL蓝盖瓶，采水量为采样瓶容量的80%左右。

【收集含余氯的水样时，应按每100mL水样加入1.5%硫代硫酸纳溶液0.4mL至水样瓶的空瓶中，然后在

101.3kPa下20min高压灭菌，用以中和水样中的余氯，终止余氯的杀菌作用。】

2、菌落总数检测：

1)将水样用力震摇20～25次；以无菌操作法吸取lmL充分摇匀的水样，注入无菌平皿中；

2)倾注约15m1已融化并冷却至65℃左右的营养琼脂于上述平皿中，并立即旋转混匀；

3)做一平行对照，同时另取一个平皿加入无菌生理盐水作为空白对照。

4)待平皿内琼脂冷却凝固后，标记、翻转平皿，使底面向上，置37℃培养箱，48h后取出进行菌落计数，即为

水样1mL中的菌落总数。

二、土壤：

1、采样：用无菌称量匙（包扎灭菌）到学院中庭取一勺土样，称量0.1mg至10mL无菌生理盐水中（15mL离心

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管），摇动混匀。混匀后用移液器取1mL样品加入9mL无菌生理盐水中，混匀制得10稀释液，依次制得10、

-3、稀释液备用。

10

2、菌落总数检测：取1ml各梯度样品稀释液至标记好的无菌培养皿中，倒入灭菌后的LB培养基，混匀。待平

板凝固后倒置放于37℃恒温培养箱培养，24h后取出计算菌落总数。

三、餐茶具/用品

1、采样：用灭菌生理盐水湿润无菌棉拭子，在茶具内、外（表面、蹲位侧边）缘涂抹50cm2,即1～1.5cm

高处一圈（口唇接触处）。用灭菌剪刀剪去（或直接在垫在离心管口掰断）棉签手接触的部分，将棉拭子放入10mL

灭菌生理盐水内充分振摇备用。

2、菌落总数检测（水杯/）

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1)无菌操作吸取充分混匀的样品1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成10的稀释液，按同法依

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次稀释成10、10、10稀释液等备用。吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换吸头。

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2)用1mL移液器取10、10、10稀释液1mL，分别注入无菌平皿中。

3)以下操作步骤同自来水中菌落总数的检验方法。

3、大肠菌群检测（水杯/+/阳性菌）

（一）乳糖胆盐发酵试验

-1稀释液；取1mL注入含9mL单料乳糖胆盐

1)取检样5mL注入含5mL双料乳糖胆盐发酵管中，混匀制得10

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发酵管中，混匀制的10稀释液，同理制得10稀释液。

2)取上述处理好的三个稀释浓度检样各1mL接种到9mL单料乳糖胆盐发酵管中。

3)将接种管置37℃培养箱，24h。

4)如培养管都不产气产酸，则报告为总大肠菌群。产酸产气者，则按以下步骤进行。

（二）分离培养

将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于37℃培养箱，培养24h。观察菌落形态，挑取符合下列