细菌培养基的制备灭菌及接种培养技术课件课件.ppt

*第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日*第一部分

细菌培养基的制备、灭菌目的要求实验材料实验程序第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日*目的要求熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。掌握培养基和无菌水的制备方法。掌握高压蒸气灭菌技术。第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻璃珠等。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序玻璃器皿的洗涤和包装培养基的制备无菌稀释水的制备培养基和玻璃器材等的灭菌第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序1（玻璃器皿的洗涤和包装）清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。棉塞的制作包装培养皿和移液管等。第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2（培养基的种类）据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。从培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2（培养基的种类）常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2

（培养基的配制方法和步骤）1.取一个300mL烧杯，装150mL蒸馏水。2.按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。注意：a.前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分b.可加热促进各成分溶解c.加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失的水量。培养基配方牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水pH数量0.75g1.5g0.75g3g150mL7.6第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2

（培养基的配制方法和步骤）3.调pH值：用10％NaOH调pH至7.6，用精密pH试纸对照。4.分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意不要污染棉塞和瓶口。5.包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。6.灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2（培养基的分装和斜面培养基的制作）☆每支试管装的量为试管高度的1/4～1/3.☆斜面长度为试管长度的1/3～1/2.第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序2（培养基的配制方法和步骤）第12页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序3（无菌稀释水的制备）取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。第13页，共38页，星期日，2025年，2月5日*实验程序4（培养基和玻