骨髓细胞微核实验.ppt

********************关于骨髓细胞微核实验第1页，共20页，星期日，2025年，2月5日机理：1有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中2断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中结论：微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点实验原理第2页，共20页，星期日，2025年，2月5日无核细胞红细胞有核细胞中微核难与正常核分叶及核突出物区别微核实验第3页，共20页，星期日，2025年，2月5日红细胞的分化成熟过程第4页，共20页，星期日，2025年，2月5日第5页，共20页，星期日，2025年，2月5日小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成第6页，共20页，星期日，2025年，2月5日*环磷酰胺（CTX）最常用的烷化剂类抗肿瘤药。在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初期时给予可致畸胎。用药后24-30小时，骨髓中微核形成达峰。第7页，共20页，星期日，2025年，2月5日*结果示小鼠骨髓嗜多染红细胞中一个微核示小鼠骨髓正常嗜多染红细胞第8页，共20页，星期日，2025年，2月5日*示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核第9页，共20页，星期日，2025年，2月5日*示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核第10页，共20页，星期日，2025年，2月5日Giemsa染色PCE胞质内含有核糖体，染色呈灰蓝色；MCN多数为圆形，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色NCE的核糖体已消失，被染成淡桔红色。NCEPCEMCN第11页，共20页，星期日，2025年，2月5日实验目的用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核第12页，共20页，星期日，2025年，2月5日【Animal】小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12周龄，体重18～20g的小鼠。【Reagents】小牛血清Giemsa染液环磷酰胺实验动物及试剂第13页，共20页，星期日，2025年，2月5日实验分组和染毒方法环磷酰胺40mg/kg模型组等体积溶剂对照组染毒方法（30h两次给药法）：两次给受试物间隔24h，第二次给药后6h取材第14页，共20页，星期日，2025年，2月5日处死：小鼠颈椎脱臼处死；取股骨：防止出血；取骨髓：小牛血清1滴推片：30度角；晾干：一定要干；固定：甲醇固定10min,需要晾干；染色：Gimesa染液染色（10~15min）冲洗：蒸馏水冲洗，晾干阅片:观察微核。染毒后操作步骤第15页，共20页，星期日，2025年，2月5日推片方法第16页，共20页，星期日，2025年，2月5日观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域油镜下观察计数多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细胞中PCE与NCE的比值。微核率（‰）=含微核PCE细胞数PCE细胞总数×1000实验方法和步骤第17页，共20页，星期日，2025年，2月5日实验结果组别动物数受检PCE总数含微核PCE数微核率阴性对照组模型组第18页，共20页，星期日，2025年，2月5日结果分析与评价本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示.PCE/NCE为评价细胞毒性的指标：正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.6～1.2)；如PCE/NCE＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制；如PCE/NCE＜0.05，则表示受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。第19页，共20页，星期日，2025年，2月5日感谢大家观看第20页，共20页，星期日，2025年，2月5日**********************************************