自发光植物培育工艺技术规范.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.020.20

CCS

FORMTEXTCS

FORMTEXTB05

FORMTEXT中国商品学会团体标准

T/FORMTEXTCSFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXX

FORMTEXT

FORMTEXT自发光植物培育工艺技术规范

FORMTEXTTechnicalSpecificationsfortheCultivationProcessofNightSelf-LuminousPlants

FORMDROPDOWN

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FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT中国商品学会??发布

STYLEREF标准文件_文件编号T/CSXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号T/CSXXXX—XXXX

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目次

TOC\o1-1\h前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4试验试剂、仪器设备及耗材 1

5培育工艺技术流程 2

6安全评估 3

7隔离措施 4

8应急措施 5

9监督评估 5

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由合肥神笔生物科技有限公司提出。

本文件由中国商品学会归口。

本文件起草单位：合肥神笔生物科技有限公司。

本文件主要起草人：。

自发光植物培育工艺技术规范

范围

本文件规定了自发光植物培育工艺的试验试剂、仪器设备及耗材、培育工艺技术流程、安全评估、隔离措施、应急措施、监督评估。

本文件适用于利用转基因技术培育以Hisps、Cph、H3h、Luz基因为基础的自发光植物。

规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

自发光植物Self-luminousplants

通过基因工程手段，将特定的发光基因导入植物基因组，使其在无需外源添加发光底物的情况下，能在黑暗环境中自发产生可见荧光的植物。

载体vector

用于携带目的基因进入植物细胞的工具，如双元表达载体pCAMBIA2300，其包含启动子、终止子、抗性基因和多克隆位点等元件。

目的基因targetgene

用于构建自发光植物的Hisps、Cph、H3h、Luz基因，来源于南比新假革耳，在真菌生物发光系统中参与荧光素合成与发光过程。

试验试剂、仪器设备及耗材

试剂

试验试剂包括：

物激素类：IAA、GA3、IBA、6-BA、2,4-D、KT、NAA、CK等；

抗生素类：硫酸卡那霉素、利福平、头孢霉素、羧苄青霉素、除草剂Bar、氨苄青霉素钠等；

培养基：固体MS（不含蔗糖和琼脂）、蔗糖、琼脂、植物凝胶、葡萄糖、活性炭、酵母提取物、胰蛋白胨（OXOID）、氯化钠等；

其它药剂：噻苯隆、次氯酸钠、乙酰丁香酮、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、过氧化氢、二甲基亚砜、丙三醇等。

试剂盒

植物总RNA抽提纯化试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、反转录试剂盒、质粒小提试剂盒等。

菌株及引物

大肠杆菌DH5α、农杆菌LBA4404、Hisps、Cph、H3h、Luz克隆引物、pCAMBIA2300载体、CaMV35S扩增引物。

仪器设备

万分之一电子天平、恒温水浴锅、冰箱、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、灭菌锅、超净工作台、核酸蛋白测定仪、光照培养箱、NanoDrop2000分光光度计、涡旋振荡仪、恒温摇床、紫外分光光度计、pH计、超低温冰箱、小型高速离心机、高速离心机、磁力搅拌器、制冰机、超纯水机等。

耗材

组培瓶、不同规格一次性培养皿、玻璃培养皿、封口膜、皮筋、无纺布、烧杯、量筒、玻璃棒、涂布棒、称量纸、滤纸、镊子、剪刀、酒精灯、不同规格离心管、不同规格锥形瓶、广口瓶、喷壶、离心管架等。

培育工艺技术流程

目的基因克隆

以目的基因片段mRNA为模板，利用反转录试剂盒合成cDNA第一链，特异性引物引导DNA聚合酶在体外快速复制特定的DNA片段合成新的DNA链。在基因克隆过程中确保目的基因序列的完整性和准确性，辅助元件和抗性基因筛选满足高效表达的基本要求。

载体构建

原则

构建载体