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诱导痰检测在气道炎症评价中的应用痰液检查已经有100多年的历史,最初主要用于肺结核和肺肿瘤的诊断。未经处理的痰液涂片,细胞分布不均,而且混在粘液中不易识别,使痰细胞学检查的准确性受到影响。1958年首次建立了诱导痰检测方法,对不能自然咳痰的患者通过吸入雾化高渗盐水诱导痰液生成,利用二硫苏糖醇等粘液溶解剂对痰进行处理,消除粘液的影响。并进一步分析痰液中细胞成分和上清液可溶性介质,用来研究气道炎症性疾病(如哮喘、COPD、间质性肺疾病),感染性疾病、肿瘤诊断等。
诱导痰流程一:评估患者:1.一般情况良好,无哮喘急性发作、慢性阻塞性肺病(肺功能FEV1%低于70%而患者一般情况良好者,可予以10min以内的诱导操作;如果高于70%,而患者有急性喘憋症状者,则避免诱导诱发气道痉挛)。动态结合患者临床症状评估,询问患者服用药物情况。如患者用药史、激素、抗过敏药等。(患儿或情况不佳的患者可考虑用生理盐水进行雾化,以降低风险)2.询问患者检查的项目,安排检查的先后顺序(ENO优先,肺功能其次,痰诱导最后进行)。3.诱导前准备:喷万托林300-400ug,静待5min后进行雾化。如果患者有当日使用万托林史,可根据患者当时临床症状决定用药与否。
诱导痰流程二:雾化1.高渗盐水(400ml0.9%生理盐水+12g浓盐水配比成3%的高渗盐水),流速1ml/min可获得较高的诱导成功率。2.雾化时间:10-15min后要求主动咳痰,肺通气功能较差的患者可缩减为5-10min,如痰量不足可继续进行诱导,但累计时间不超过30min。
诱导痰流程三:注意事项:1.重症哮喘患者不宜进行高渗盐水诱导,当FEV1小于70%时,对患者进行自然咳痰或等渗盐水诱导。2.诱导前必须准备好相关的抢救设备和药物,诱导过程中密切观察患者表现,以防气道收缩导致呼吸困难。(具体抢救措施参照肺功能室的哮喘发作抢救措施)3.诱导过程中注意尽量减少唾液对痰的污染和稀释,如每次咳痰前均要漱口,尽量吐净唾液后立即咳痰。(留痰后及时分离选取标本)4.独立及安静的雾化空间,清晰的雾化诱导指引。(1)向患者讲述雾化程序,观察痰液性状,留取粘稠的白色或黄色痰液,摒弃口水、唾沫、鼻腔分泌物。选取方式有两种:a、全取法。b、选取法。(2)评判痰液是否合格标准(显微镜下取材)5.每个患者做完检测,均需酒精喷洒操作台消毒。
诱导痰流程四:痰处理:1、痰标本冷藏保存:4℃,尽可能在3小时内处理。2、处理标本:1)裂解:全取法是不经挑选,咳出来的全部收集起来,选取法是经挑选的。使用裂解剂0.1%(二硫苏糖醇--DTT),全取法收取的痰液加入与痰液等量(ml)的DTT;选取法则是将选好的痰标本称重(g),加入重量数值4倍(ml)的粘液裂解剂。37℃环境水浴下水浴5-10分钟,同时震荡器进行震荡充分裂解(time,frequence)。较浓的痰栓需要增加裂解时间。2)震荡:充分使痰液与裂解剂混匀,促进裂解。(震荡仪)(time)3)过滤:使用专用过滤纸(48目),将充分裂解的痰液过滤,去除杂质。4)离心(3000转速,10分钟;3600转速,6分钟)离心力,5)涂片,充分风干。或用甩片机6)标本固定,放入10%甲醛固定10min(不超过48h),清水冲洗3min。7)染色:苏木素-伊红染色(苏木素目前染色1min,冲洗3min,放入1:99盐酸酒精中脱色2-3秒,冲洗3min,伊红染色,冲洗至少6min)。
诱导痰流程五:所用相关器材材料如下:超声波雾化器电子天平(g)水浴箱振荡器离心机EP管移液器(1000ul100ul)枪头试管显微镜玻片48目尼龙馏网一次性口嘴、雾化管道、培养皿。水平层流净化操作台
试剂LPS二硫苏糖醇—DTT乙酸钠甲醛苏木素伊红盐酸100%酒精
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