GB_T30989-2024高通量基因测序技术规程.pptxVIP

GB/T30989-2024高通量基因测序技术规程国家标准化管理委员会制定的2024年最新技术规范，为基因测序全流程提供标准化指南。本规程涵盖从样本采集到数据分析的完整技术体系。作者：

标准制定背景1归口单位由TC387（全国生化检测标准化技术委员会）负责归口管理。2解决问题针对高通量基因测序技术领域存在的标准化问题提供解决方案。3发展目标推动生物技术创新与规范发展，提升我国基因测序产业水平。

标准起草单位深圳华因康基因科技有限公司作为主要起草单位，提供技术规范与行业经验。国家人类基因组南方研究中心提供核心技术支持与研究数据验证。中国科学院北京生物物理研究所负责基础理论研究与技术评估。上海交通大学医学院附属瑞金医院提供临床应用验证与医学检验标准。

高通量基因测序技术概述定义与技术特点大规模并行测序技术，可同时分析数百万个DNA片段。测序技术发展历程从第一代Sanger测序到第三代单分子测序的演进。关键技术指标包括通量、准确度、读长和数据质量四大核心指标。应用领域分布覆盖医学诊断、生物研究和农业育种等多个领域。

测序前样本准备样本采集规范明确不同样本类型的采集方法与容器要求。采集过程需避免污染。样本保存条件规定不同样本类型的温度、时间和保存液要求。长期保存需低温冷冻。DNA/RNA提取标准规范提取方法、试剂和设备要求。确保核酸质量满足测序需求。质量控制要求明确浓度、纯度和完整性评估标准。建立质控记录和追溯机制。

文库构建技术片段化将DNA样本打断为特定长度片段，可使用物理或酶切方法。接头连接在DNA片段两端连接测序接头，便于后续扩增和检测。扩增通过PCR技术扩增目标片段，提高测序信号强度。纯化评估去除反应杂质，评估文库质量和浓度，确保达标。

测序仪器标准仪器性能指标规定读长范围、单次通量、错误率和运行时间等核心参数标准。校准与维护明确校准周期、方法和验收标准，确保仪器稳定运行。数据采集标准规范原始数据格式、存储结构和质量控制流程。设备兼容性要求确保与上下游设备和软件系统的接口标准化与数据兼容。

测序参数优化最佳测序质量平衡各参数达到最优测序效果错误率管理控制测序误差在可接受范围内深度控制根据应用场景调整测序深度读长优化适配不同应用的片段长度参数优化是确保测序质量的关键步骤。合理的参数设置能够显著提升数据可用性，降低重复测序的需求。

数据产出与质量控制原始数据评估包括总读段数、碱基质量分布和测序深度评估。质控阈值需明确设定。每个测序项目必须生成标准化质控报告，记录关键参数和异常情况。数据过滤标准规定低质量读段、接头序列和污染序列的过滤标准。过滤日志需完整保存。过滤前后的数据统计对比是评估数据质量的重要依据。质量分数计算采用Phred质量分数评估碱基准确性。Q30以上比例需达到规定阈值。测序质量分数需遵循国际通用计算方法，确保结果可比性。

生物信息分析流程数据过滤与质控去除低质量数据和污染序列序列比对将读段映射到参考基因组变异检测鉴定SNP、InDel等变异注释与解读分析变异的生物学意义生物信息分析是测序数据转化为生物学意义的关键步骤。标准化的分析流程确保结果可重复、可验证。

基因组变异检测SNP鉴定单核苷酸多态性是最常见的变异类型，检测标准包括覆盖度、质量分数和等位基因频率。结构变异分析包括插入、缺失、倒位和易位等大片段变异，需特殊算法支持检测。拷贝数变异检测基因组片段的复制或缺失，与多种疾病相关，检测需要足够的测序深度。

转录组测序标准测序类型应用场景主要指标全转录组测序基因表达谱分析测序深度≥20M读段长读长测序转录本结构研究读长≥1kb靶向测序特定基因研究覆盖率≥99%小RNA测序miRNA研究reads数≥10M

表观基因组测序表观基因组测序技术揭示DNA甲基化、组蛋白修饰和染色质结构等非序列变化的遗传调控机制，为疾病研究和药物开发提供新视角。

单细胞测序技术单细胞分离方法微流控技术流式细胞分选显微操作液滴法文库构建特殊要求超微量样本处理扩增偏好性控制条形码标记灵敏度优化数据处理算法降维聚类分析噪声过滤轨迹分析细胞类型鉴定

临床应用规范样本采集与处理严格遵循临床样本规范检测与分析应用标准化测序流程结果解读基于临床证据评估意义医学应用指导临床决策与治疗临床应用必须遵循医疗器械监管要求，确保检测质量和患者安全。数据分析与解读需基于最新临床证据，并符合伦理与隐私保护规定。

医学检验标准99.9%分析灵敏度检测已知变异的成功率99.8%分析特异性排除假阳性的能力98.5%重复性同一样本重复检测一致率97.5%再现性不同实验室间结果一致率

数据管理与存储数据安全标准传输加密访问权限控制数据脱敏处理安全审计跟踪备份与恢复多级备份策略定期恢复测试异地备份灾难恢复计划格式兼容性标准文件格式元数据规范版本控制转换工具

生物安全要求生物安全