植物组织培养实验(4) 水稻成熟胚愈伤组织的诱导.pptVIP

实验四水稻成熟胚愈伤组织的诱导（一）实验目的掌握水稻成熟胚愈伤组织的诱导技术，熟悉植物组织培养操作过程。（二）实验原理在一定的条件下，植物种子的胚和胚乳都可以脱分化形成愈伤组织，在这一过程中同一类植物生长调节剂中不同的化合物可能会有不同的效果。（三）实验材料和用具实验材料：水稻种子实验药品：MS、1mg/mlNAA、1mg/ml6-BA、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精、无菌水。灭菌培养基：MS5、MS6实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤配制以下培养基各100ml：MS1：MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LNAAMS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/LNAAMS7：MS+0.1mg/LBA+2.0mg/LNAA取200ml烧杯3只，标记，各加入4gMS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。分别加入1mg/ml6-BA100、200、10μl，并不断搅拌。分别加入1mg/mlNAA50、10、200μl，并不断搅拌。用1mol/LHCl或NaOH调节pH至5.8～6.0。分装。将3种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。4.接种水稻种子去壳，70％乙醇浸泡30s，2％次氯酸钠液（加1～2滴吐温-80）浸泡20min。进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手、盛放外植体的烧杯外壁和工作台面，点燃酒精灯。将次氯酸钠倒掉，加无菌水冲洗3～5次。每平皿接种5粒。每组每种培养基各4平皿。光照培养箱25℃暗培养。作业1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。1周后计算每种培养基的愈伤组织诱导率（形成愈伤组织的外植体数/总接种外植体数×100％），比较其诱导效果。