植物组织培养实验(6) 菊花不定芽的增殖和生根.pptVIP

实验六菊花不定芽的增殖和生根（一）实验目的掌握菊花不定芽的增殖和生根技术，进一步熟悉植物组织继代培养操作过程。（二）实验原理在不同的条件下（主要是植物生长调节剂配比的不同），不定芽可以增殖产生更多的不定芽，也可以诱导生根。生根培养基要减少或除去细胞分裂素，增加生长素。（三）实验材料和用具实验材料：菊花不定芽实验药品：MS、1mg/mlNAA、1mg/ml6-BA、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精。灭菌培养基：MS4、MS7和MS8实验用具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。（四）实验步骤配制以下培养基各100ml：MS8：MS+2.0mg/LNAAMS9：MS+3.0mg/L2,4-D+3.0mg/LKT取200ml烧杯2只，标记，各加入4gMS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。MS8加入1mg/mlNAA200μl，并不断搅拌。MS9分别加入1mg/ml2,4-D和KT各300μl，并不断搅拌。用1mol/LHCl或NaOH调节pH至5.8～6.0。分装。将2种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。4.接种进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用顺序排好。在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后夹取不定芽，在无菌滤纸（平皿）上剪成单芽，转移至新鲜培养基上，每瓶接5芽。每组每种培养基接种4瓶。光照培养箱25℃、60％光照16h/d培养。作业1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌芽数和芽外的菌落数，分析染菌原因。1周后观察每种培养基上不定芽的变化情况，是芽增殖还是生根？计算其芽（根）的诱导率（形成芽（根）的芽数/总芽数×100％）。