DB22_T2391-2015_“三系”杂交大豆种子纯度鉴定DNA分析方法_吉林省.docxVIP

ICS65.020.01

DB22

B21

吉林省地方标准

DB22/T2391—2015

“三系”杂交大豆种子纯度鉴定DNA分析

方法(SSR)

Assessmentofthepurityofthree-linehybridsoybean-DNAanalysismethod

(SSR)

吉林省质量技术监督局

发布

DB22/T2391—2015

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。

本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：张春宝、彭宝、赵丽梅、张伟龙、张伟、张井勇、闫昊、赵鑫。

I

DB22/T2391—2015

三系杂交大豆种子纯度鉴定DNA标记分析方法（SSR）

1范围

本标准规定了“三系”杂交大豆种子纯度鉴定SSR标记分析方法的原理、纯度检测程序、结果计算

及结果报告。

本标准适用于“三系”杂交大豆品种的纯度鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.1农作物种子检验规程总则

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

NY/T1788大豆品种纯度鉴定技术规程SSR分子标记法

DB22/2209杂交大豆种子

DB22/2209界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了DB22/2209

雄蕊发育退化或败育，不能产生有功能的花粉，但它的雌蕊发育正常，能接受正常花粉而受精结实，

保持系可以保持不育系的不育特性，保持系和不育系杂交，当代可以结实，但是子代仍然是不育系，

可以让不育系得到繁殖，保有不育系材料。

常规大豆品种，它的特殊功能是用它的花粉授给不育系，所产生的杂交种育性恢复正常，能自交结

雄性不育系、保持系和恢复系三系配套育种，不育系为生产大量杂交种子提供了可能性，借助保持

1

DB22/T2391—2015

杂交大豆hybridsoybean

用不育系作母本与恢复系杂交，得到的F1种子。

4原理

简单序列重复（simplesequencerepeats，SSR）是由几个核苷酸为重复单元的长达几十至几百个

核苷酸的串联重复序列；由于基本单元重复次数的不同，而形成SSR座位的多态性；根据SSR座位两侧保

守的单拷贝序列设计一对特异引物来扩增SSR序列，即可揭示其多态性。SSR标记具有共显性的特点，鉴

于母本不育系和父本恢复系在恢复基因的特征连锁区域存在差异，而F1杂交种子具有双亲等位基因的互

补带型，据此特征选择恢复基因连锁SSR标记进行分析，可用于区分杂交种和伪杂种。

5纯度检测程序

5.1取样

5.1.1应按GB/T3543.2的规定扦样，从供试样品中随机选取100粒种子。

5.1.2应按GB/T3543.4规定的方法进行发芽，随机选取其中不少于50株幼苗；也可从5.1.1中直

接选取不少于50粒干种子。

5.2

引物确定

根据不同杂交种品种特异性从14对SSR引物（见附录A）中选取3对作为测试引物。

以幼苗为供检测样品，需称取50mg叶片放入2ml离心管中，加液氮用玻璃棒研磨至粉末状；以干

种子为供检测样品，需单粒研磨成粉，称取50mg豆粉放入2ml离心管中。以上样品DNA提取，应按NY/T

1788执行。

5.3.2.1PCR反应体系

反应体系包括1×PCR缓冲液；4种dNTPs混合物0.2mmol/L；正、反向引物各0.15μmol/L；TaqDNA

聚合酶1U；待测样品DNA20ng，加双蒸水补足至25μL。

5.3.2.2PCR反应程序

94℃预变性4min；然后94℃变性30s，46℃～55℃退火30s，72℃延伸30s，运行30

个循环；最后72℃10min，4℃条件下保存。

6结果计算

2

DB22/T2391—2015

杂交种纯度（P）按公式1计算：

P=NT?NF

×100(1)

NT

式中：

P——杂交种纯度以%表示；

NT——供检种子数量，单位为粒；

NF——判定为伪杂交种子数量，单位为粒。

7结果报告

应按GB/T3543.1的规定执行。

3

DB22/T2391—2015

AA

附录A

（规范性附录）

用于“三系”杂交大豆种子鉴定的SSR分子标记引物

用