DB23_T2476—2019_大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法_黑龙江省.docxVIP

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B16

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T2476—2019

大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法

2019-12-19实施

发布

黑龙江省市场监督管理局

DB23/T2476—2019

前??言

本标准依据GB/T1.1—2009的编写规则起草。

本标准由黑龙江省农业农村厅提出。

本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心、哈尔滨瑞康源生物科技有

限公司、黑龙江省绿色食品科学研究院。

本标准主要起草人：李春杰、王从丽、尤佳、胡岩峰、王英男、潘凤娟、黄铭慧、姜野。

I

DB23/T2476—2019

大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法

1

范围

本标准规定了大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法中的试剂、材料和仪器设备、空气环境与培养条件、

鉴定材料、育苗与移苗、培养、线虫接种液制备、接种、调查、抗性评价方法。

本标准适用于对大豆孢囊线虫不同生理小种的抗性鉴定。

2

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB3095环境空气质量标准

GB4404.2粮食作物种子第2部分：豆类

NY/T3059大豆抗孢囊线虫鉴定技术规程

3

试剂、材料和仪器设备

3.1

试剂

霍格兰氏（Hoagland）营养液：硝酸钙945mg/L、硝酸钾607mg/L、磷酸铵115mg/L、硫酸镁

493mg/L、铁盐溶液2.5mL/L、微量元素5mL/L、pH6.0，无菌水1L，使用时稀释20倍。

铁盐溶液：七水硫酸亚铁2.78g、乙二胺四乙酸二钠（EDTA.Na）3.73g、无菌蒸馏水

500mL、pH5.5。

微量元素液：碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、

硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L。

（a）植物生长袋（长17.8cm，宽16.5cm）、（b）快捞夹（长29.8cm，宽23.3cm）、（c）快捞

架（长39.5cm，宽32.5cm）、（d）蛭石（20目）、（e）培养钵（高11.5cm，直径20cm）。

（a）孢囊分离筛（20目、100目、200目、500目）、（b）移液器（5mL）、（c）线虫孵化池、

（d）线虫计数板、（e）光学显微镜（4~40×）、（f）恒温光照培养箱、（g）高压蒸汽灭菌器（121℃、

30min）。

4

室内空气环境质量要求符合GB3095的规定。

4.2培养条件

2

DB23/T2476—2019

培养箱调至光周期为16h光照、8h黑暗、白天温度28℃、夜间温度22℃、相对湿度70%的循环程

序。

5

鉴定材料

鉴定材料种子质量应符合GB4404.2的规定。

6育苗与移苗

6.1育苗

将待鉴定的种子播种在装有无菌蛭石的培养钵中，每钵40粒，常规管理。3d后种子萌发出幼苗，

剔除生长不良的植株，保留生长一致的30株幼苗备用。

6.2移苗

（a）浸湿生长袋。向直立的生长袋内滤纸顶端夹缝内加入无菌水10mL，使生长袋中的滤纸充分浸

湿且生长袋底部有少量无菌水存留。

（b）移苗。将30株备用幼苗转移到浸湿的滤纸顶端夹缝内，保持子叶高于生长袋上沿，每个生长

袋内移入1株幼苗。

（c）摆放。每2个生长袋放入1个快捞夹中，将快捞夹放到快捞架上，每个快捞架上放置30个快

捞夹。

7培养

8

8.1

扩繁线虫

8.2收集孢囊

收集感病品种根部及土壤中的孢囊：将感病品种根和根部土壤放入盛有1/3清水的1L烧杯中，用

玻璃棒将泥水混合物剧烈搅拌，静置1min左右，将上清液依次倒入20目和100目的孢囊分离筛中。用

高压水枪冲洗20目筛子上的感病品种根、土壤及残留物，将落入100目筛子上的孢囊冲洗至烧杯中，

用置于漏斗架上的单层滤纸（直径为12.5cm）过滤。用毛笔轻轻地刷分布于滤纸边缘的孢囊，收集后

即得到大量孢囊。

将收集的孢囊转移到200目筛子上，下面套500目筛子。用橡皮塞在200目筛子上碾磨孢囊使卵释

放出来，高压水枪冲洗，收集落于500目筛子上的卵。

将线虫卵悬液加入线虫孵化池内，置于恒温培养箱（28℃，黑暗）内孵化4~5d，收集孵化出来的

3

DB23/T2476—2019

8.5二龄幼虫接种液制备

将二龄幼虫悬浮液注入线虫计数板，于光学显微镜下调查二龄幼虫浓度，不断稀释使线虫浓度调至

170条/mL，并作为接种液，备用。大豆孢囊线虫不同生理小种二龄幼虫接种液制备方法相同。

9接种

待测植株侧根