DB23_T2525—2019_主要肥效微生物筛选技术规程_黑龙江省.docxVIP

ICS65.020.20

B05

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T2525—2019

主要肥效微生物筛选技术规程

黑龙江省市场监督管理局

DB23/T2525—2019

前??言

本标准依据GB/T1.1的编写规则起草。

本标准由黑龙江省农业农村厅提出。

本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。

本标准由黑龙江省农业科学院土壤肥料与环境资源研究所和哈尔滨市芮煊科技有限公司起草。

本标准主要起草人：王爽、赵晓宇、李伟群、陈雪丽、万书明、孙磊、姜辉、王晓军、张磊、常本

超。

I

DB23/T2525—2019

主要肥效微生物筛选技术规程

1

范围

本标准规定了主要肥效微生物筛选技术的术语和定义，样品采集，肥效微生物的筛选及保藏。

本标准适用于根瘤菌、溶磷菌和解钾菌三种肥效微生物的筛选。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T889-2004土壤速效钾和缓效钾含量的测定

LY/T1232-2015森林土壤全磷的测定

SN/T2632微生物菌种常规保藏技术规程

3术语和定义

从自然界分离筛选，通过自身代谢活动产生固氮、溶磷、解钾等功能，使植物获得特定肥料效应，

3.2

在琼脂平板上，溶磷菌在培养过程中分泌有机酸，将培养基中不透明的难溶磷酸钙溶解后形成的透

明区。

铁锹、小铲、镊子、GPS定位仪、记号笔、装土袋子（布袋）、塑料袋、剪子、标签纸、冰盒、75%

酒精、吸水纸、变色硅胶离心管。

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DB23/T2525—2019

视土壤水分、通气状况和植株大小决定植物根系的挖掘深度，将整株植物的根系挖出，轻轻敲掉根

系周围大的土块，然后将根放入塑料袋中，贴好标签带回实验室。

4.2.3根瘤样品的保存

轻轻抖去根系上的土壤，将根在水中浸泡、洗净、晾干或用吸水纸吸干。用剪刀将主根上个大、粉

红色的瘤子（带点根）小心剪下，保存于盛有干燥剂（采用变色硅胶）的5mL的离心管中，置于4℃条

件下冷藏存放，每天对保存物进行检查，发现硅胶由蓝色完全变为红色时，应及时转移到新管子中。在

15d内完成根瘤菌的分离工作。

4.3土壤样品采集

4.3.1采样时间

溶磷、解钾微生物来源的土壤样品采集可在植物生长的整个过程中进行。

4.3.2

采样方法

去掉地表大块沙石和其他杂物。根际土壤，用干净铁锹或小铲沿植物周围往下挖，尽量将整株植物

的根系挖出，轻轻敲掉根系周围大的土块，然后将根放入塑料袋中，将根上土抖下或用手从塑料袋外从

根上撵下，贴上标签，封口，同时在塑料封口袋上写清采样编号，放入冰盒带回实验室处理。根围土壤，

采样深度一般是0cm～30cm土层，需记录采取土样的深度（cm）和距离植株根系的距离（cm），沿植物

外10cm周围往下挖5cm～20cm的土壤，在植物周围对称采集5个点的土壤样本。然后放入塑料袋中，

贴上标签，封口，同时在塑料封口袋上写清采样编号，放入冰盒带回实验室处理。采集不同采样点前需

将工具上的残土清理干净。

4.2.3中的保存的根瘤样品用95%乙醇浸泡根瘤30s，无菌水清洗3次～4次，再用0.1%升汞（氯化汞）

浸泡根瘤5min，再用无菌水冲洗根瘤4次～5次。在无菌环境下用无菌刀片切开根瘤，用无菌镊子夹取根

瘤，使横断面接触配置好的YMA培养基（配置方法见附录A1）斜面或平板表面，并将根瘤内汁液涂布于

培养基表面，在试管或培养皿表面写好编号，放在25℃～28℃恒温培养箱中倒置培养，在20d内每天观

察，视菌落生长情况决定培养时间。

事先准备好无菌的带玻璃珠加水的试管或离心管一支，在无菌环境下从试管或平板上长出的乳白

色、凸起菌落挑出一接种环入管内水中，在振荡器上振荡1min，使菌苔充分分散成菌悬液，取一环菌液

在YMA固体培养基上划线接种，平板放在25℃～28℃恒温培养箱中倒置培养。待菌落长出后，挑取乳白

色、凸起的菌落反复划线3次以上获得纯菌落。

2

DB23/T2525—2019

a）水培法：培养基质为微氮培养液，其配方见附录A6和A7，按照附录B1的步骤完成根瘤菌结瘤能

力的验证。

b）砂培法：培养基质为加入微氮培养液的石英砂，按照附录B2的步骤完成根瘤菌结瘤能力的验证。

c）土培法：培养基质为灭菌土壤，按照附录B3的步骤完成根瘤菌结瘤能力的验证。

观察各植株根部结瘤情况，记录植株株高（cm）、主根和侧根的瘤数（个/株）、主根和侧根瘤重

（g/株）、地上部鲜重（g/株）。

5.2溶磷、解钾菌的筛选

5.2.1溶磷、解钾菌的分离

称取土样10g，置于装有无菌玻璃珠的三角瓶中，分离溶磷菌应加入90mL无菌水，分离解钾菌应加

入0.85%NaCl溶液。常温下以160rpm