DB51T 1861-2014 桑椹菌核病诊断技术规程　.docxVIP

ICS65.020.30B47

DB51

四川省地方标准DB51/T1861—2014

桑椹菌核病诊断技术规程

2014-11-11发布2014-12-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T1861—2014

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4诊断 1

附录A（资料性附录）桑椹菌核病的浸染与流行 4

附录B（资料性附录）桑椹菌核病病果症状和病原菌 5

II

DB51/T1861—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准附录A、附录B为资料性附录。

本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局发布。

本标准起草单位：四川省蚕业管理总站、西南大学生物技术学院、四川省农业科学院蚕业研究所。本标准主要起草人：马露芸、余茂德、刘刚、张学清、吴钢、吕蕊花。

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DB51/T1861—2014

桑椹菌核病诊断技术规程

1范围

本标准规定了桑椹菌核病早期诊断、田间诊断和实验室诊断的方法。本标准适用于桑椹菌核病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T29572桑椹（桑果）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

菌核sclerotium

真菌生长到一定阶段，菌丝体不断分化，相互纠结在一起形成的颜色较深且坚硬的菌丝休眠体。3.2

桑椹菌核病sclerotialdiseaseofmulberryfruit

又称桑白果病，属真菌类病害。病原寄生花被及子房，形成白椹，危害桑果的产量、留种及育苗。桑椹菌核病包括桑椹肥大性菌核病[Ciboriashiraiana（P.Hennings)Whetzel)]、桑椹缩小性菌核病（ScleromitrulashiraianaS.Imai）和桑椹小粒性菌核病[Ciboriacarunculoides(Siegl.etJenk.)Whetz.etWolf.]等。

4诊断

4.1早期诊断

1月下旬到4月上旬，观察桑园及周围地表是否有菌核及菌核抽生的子囊盘出现。一旦发现，可初步确定存在桑椹菌核病病原菌。观察菌核及其抽生子囊盘的形态发育。

4.2田间诊断

4.2.1诊断时间

3月中旬至4月中旬，桑椹始熟期。

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DB51/T1861—2014

4.2.2诊断方法

在挂果枝上寻查桑椹菌核病的典型症状病果。4.2.3判定

按以下原则进行：

——病果症状与附录B.1.1相同，初步诊断该病为肥大性菌核病。——病果症状与附录B.2.1相同，初步诊断该病为缩小性菌核病。——病果症状与附录B.3.1相同，初步诊断该病为小粒性菌核病。

4.3实验室诊断4.3.1试剂

4.3.1.175%乙醇、0.1%氯化汞（HgCl2）、马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基。

4.3.1.2分析用水按GB/T6682规定执行。

4.3.2仪器设备

高压灭菌锅、超净工作台、光照培养箱、显微镜、三角瓶、二重皿、玻璃试管、接种针等。4.3.3方法

4.3.3.1样品采集

采集具有附录B.1.1、B.2.1和B.3.1症状的桑椹，分别装入纸袋中，5d内送达实验室。4.3.3.2样品存放

送达实验室的样品在2℃~8℃保存不超过7d，长期保存应阴干后再置于4℃冰箱中。4.3.3.3病原鉴定

4.3.3.3.1病原菌分离纯化

在无菌环境下，取病椹发病的小果1个，依次用75%乙醇浸泡消毒1min，0.1%氯化汞浸泡消毒2min，无菌水漂洗3次，置于无菌滤纸上吸去表面多余水分。用无菌解剖刀将小果切成两半，将切面贴于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基平板上，于25℃培养48h后挑取单菌落边缘菌丝进行分离纯化。分离纯化后的菌株接种于另一PDA培养基平板中央，25℃、12h光照与黑暗交替培养7d～10d，菌丝纠结成团并转为黑色，15d后形成成熟的菌核。

4.3.3.3.2子实体诱导产生子囊和子囊孢子

将河沙（经2mm筛子过滤）装于玻璃瓶中，