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基因转换让蝌蚪长出三颗眼睛基因克隆胚芽造就健康婴儿PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点LigationEcoRIEcoRIREdigestionVectorEcoRIVectorREdigestionRecombinantvectorRecombinantvectorRecombinantvectorEcoRIEcoRIEcoRIEcoRIEcoRI①单酶消化的粘性末端连接：连接效率高;载体需去磷酸;双向连入载体VectorSmaIHeaIIISmaIREdigestionREdigestionVectorLigationHelfofsmaIRecombinantvectorSmaIHelfofHeaIIIRecombinantvectorSamIHelfofsmaIHelfofHeaIII②平头末端连接：连接效率低双向连入载体自身环化率高TargetgeneEcoRIBamHIEcoRIBamHIVectorVectordigestiondigestionLigationVectorEcoRIBamHI③双酶消化的粘性末端连接：连接效率高;定向连接.VectorEcoRVEcoRVdigestionVectorTaqDNApolymerasedTTPT-Vector55TT55AAPCRproductRecombinantvectorAATTPCRproductLigation④T-A粘性末端连接：连接效率高双向连入载体自身环化率1234522557294时间（min）温度（℃）PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍94℃55℃37℃TaqDNA聚合酶（thermusaquaticus)酶活性(%)温度(℃)4050607080901001008060402072℃94℃55℃PCR循环PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点标准的PCR反应体系4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性子链延伸DNA加倍DNA变性形成2条单链模板DNA95℃50℃引物1引物2DNA引物引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶第1轮结束95℃第2轮开始72℃TaqTaqTaqTaq72℃第2轮结束模板DNA第1轮扩增第2轮扩增第3轮扩增第4轮扩增第5轮扩增第6轮扩增
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