《实验室常用培养基制备方法》课件.pptVIP

实验室常用培养基制备方法微生物培养基是微生物学实验室的基础，为微生物生长提供必要的营养和环境条件。正确制备培养基是确保实验成功的关键步骤。本课程将详细介绍各类培养基的组成、分类、制备方法及应用场景。

培养基基本概述培养基定义培养基是指能够满足微生物生长繁殖所需营养物质的人工配制的混合物。它为微生物提供碳源、氮源、能量来源、无机盐类、生长因子等必需营养素，并维持适宜的pH值、渗透压等生理条件。主要作用培养基作为微生物的食物和住所，不仅提供生长所需的各种营养物质，还创造适宜的生长环境。它是分离纯化微生物、研究微生物形态结构、生理生化特性、遗传变异等重要研究工具。微生物培养基础条件

培养基的分类按成分分类合成培养基：完全由化学纯品配制，成分明确非合成培养基：含有天然成分，精确组成未知半合成培养基：合成与非合成成分混合配制按物理状态分类液体培养基：不含固化剂半固体培养基：含0.2-0.5%琼脂固体培养基：含1.5-2.0%琼脂按用途分类普通培养基：适合大多数非苛养微生物选择性培养基：抑制非目标菌生长鉴别培养基：可区分不同类型微生物富集培养基：促进特定微生物生长

合成培养基简介成分已知且可控合成培养基由化学纯品组成，各组分的种类和含量完全已知且可精确控制。常用化合物包括葡萄糖、氯化钠、硫酸铵、磷酸盐等。这种精确控制使研究人员能够调整特定组分，研究其对微生物生长的影响。适用范围合成培养基主要用于特定的营养需求研究、酶活性测定、代谢途径分析等精确实验。由于成分单一明确，特别适合研究微生物的最小营养需求和代谢特性。典型应用

非合成培养基简介20-30%蛋白胨含量LB培养基中的典型含量范围，为微生物提供氮源和氨基酸0.5%酵母提取物提供B族维生素和氨基酸等生长因子0.5-1%牛肉膏浓度提供肉类提取物中的氨基酸、脂肪酸和矿物质3-10种未知组分数量非合成培养基中典型的未知化学成分数量非合成培养基由天然成分组成，如牛肉膏、蛋白胨、酵母提取物等，其精确化学组成未完全确定。代表性培养基包括LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基等，这些培养基富含氨基酸、维生素、微量元素等营养成分，能满足大多数微生物的生长需求。非合成培养基的优点是配制简单，营养丰富，适用于常规细菌培养和分离。然而，由于成分不完全确定，批次间可能存在差异，不适合精确的营养研究。

半合成培养基简介基本概念半合成培养基是合成培养基和非合成培养基的组合，既含有已知的化学成分，也含有天然提取物常见组成通常含有葡萄糖等已知化合物，同时添加酵母提取物、蛋白胨等天然成分适用范围广泛用于真菌、放线菌及苛养型细胞培养，平衡了营养需求与组分确定性优势特点兼具合成培养基的可控性和非合成培养基的营养丰富性，满足特殊培养需求半合成培养基在生物技术、药物筛选和发酵工业中应用广泛。例如，YPD培养基（酵母提取物-蛋白胨-葡萄糖）是酵母培养的经典半合成培养基，而改良的Sabouraud葡萄糖琼脂则广泛用于真菌培养。这类培养基既能满足特定微生物的营养需求，又保持了一定的组分可控性。

培养基的基本组成水基础溶剂，通常使用蒸馏水或去离子水碳源葡萄糖、乳糖、麦芽糖、淀粉等3氮源蛋白胨、酵母提取物、硝酸盐、氨盐等无机盐和微量元素磷酸盐、硫酸盐、钙、镁等生长因子和添加剂维生素、血清、抗生素、pH指示剂等培养基中的碳源主要以糖类形式提供，为微生物提供能量和碳骨架。氮源则用于合成蛋白质和核酸，可以是有机氮（如蛋白胨）或无机氮（如铵盐）。无机盐提供细胞代谢所需的各种离子，而微量元素则参与多种酶的活性中心组成。对于苛养型微生物，可能需要额外添加多种生长因子，如维生素、氨基酸、核酸前体等。培养基的pH缓冲系统和渗透压调节也是保证微生物正常生长的重要因素。

基础培养基：LB培养基介绍蛋白胨酵母提取物氯化钠琼脂(固体培养基)水LB(Luria-Bertani)培养基是最常用的细菌培养基之一，特别适合大肠杆菌等肠杆菌科细菌的培养。LB培养基中的蛋白胨提供氨基酸、短肽和无机盐，是主要的氮源；酵母提取物提供维生素B族和微量元素；氯化钠则维持适宜的渗透压。LB培养基具有营养丰富、配制简单、价格经济等优点，适用于细菌的常规培养、基因克隆和蛋白质表达等实验。标准LB培养基的pH值通常在7.0-7.2之间，可根据实验需要进行调整。

LB培养基制备流程原料称量精确称量各组分：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠（1L用量）溶解混合将称量好的粉末溶于800ml蒸馏水中充分搅拌至完全溶解pH调整用NaOH或HCl调节pH至7.0-7.2，然后加水至1000ml灭菌处理121℃高压蒸汽灭菌15-20分钟，冷却至约50℃后使用制备LB固体培养基时，在上述步骤2后加入15g琼脂，混合后再进行pH调整和灭菌。灭菌后的液体培养基应在无菌条件下保存，固体培养基则需倒入培养皿中，待凝