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选修3

专题1基因工程

基因工程的概念

基因工程是指按照人仅的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因术,

赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程

是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组术。

（一）基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”一一限制性核酸内切酶（限制酶）

（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

2（）功能：能够识别双链州A分子的某种特定的核苜酸序列，并且使每一条链中特定部

位的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

3（）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

2“分子缝合针”一一DNA连接酶

1（）两种DNA连接酶E（-coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：

①相同点：都缝合磷酸二酯键。

②区别：E-coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间

的磷酸二酯键连接起来；一而「DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间

的效率较低。

⑵与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单仝核苴酸加到已有的核甘酸片段的末

端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。

3.“分子运输车”一一载体

（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入一

③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

2（）最常用的载体是质检，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具

有自我复制能力的双链环状DNA分子。

3（）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒

［二）基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取

1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因.

2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反

转录法和化学合成法。

3.PCR术扩增目的基因

（1）原理：DNA双链复制

2（）过程：第一步：加热至90〜95CDNA解链；第二步:冷却到55〜60℃,引物结合到

互补DNA链；第三步:加热至70〜75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

第二步：基表达载体的构建

1.目的：使目的基在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基能够表

达和发挥作用。

2.组成：目的基+启动子+终止子+标记基

（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段,位于基的首端,是RNA聚合酶i只别和结

合的部位，能驱动基转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。

2（）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基的尾端。

（3）标记基的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基,从而将含有目的基

的细胞筛选出来。常用的标记基是抗生素基，

第三步：将目的基导入受体细胞

1.转化的概念：是目的基进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2.常用的转化方法：

将目的基导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基枪法和花

粉管通道法等。

将目的基导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是恚情

卵。

将目的基导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原是繁殖快