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第三章蛋白质组与蛋白质组学

第三章蛋白质组与蛋白质组学DNAmRNA蛋白质转录翻译基因蛋白质细胞特异性基因表达生理状态蛋白质相互作用温度应激状态培养条件药物作用数量有限结构相对稳定复杂性多变性直接反应生命现象复杂的调控

01第三章蛋白质组与蛋白质组学02第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义03第二节蛋白质组及其质点的分离与分析04第三节蛋白质相互作用的研究05第四节蛋白质数据库及其应用

第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义

logo第一节蛋白质组与蛋白质组学的定义蛋白质组protein+genomeproteome一种基因组所表达的全套蛋白质一个细胞或一个机体的基因所表达的全部蛋白质

一、蛋白质组与蛋白质组学的定义蛋白质组学旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式与功能模式从整体的角度分析、鉴定细胞内动态变化的蛋白质的组成、结构、性质、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间、蛋白质与大分子之间的相互作用与联系,揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律

第二节蛋白质组及其质点的分离与分析

第二节蛋白质组及其质点的分离与分析01分离纯化02分析鉴定

一、分离纯化选择材料3124破碎细胞蛋白质混合物的分离方法蛋白质分离纯化的条件

一、分离纯化选择材料所含目的蛋白质含量材料易得

一、分离纯化机械法物理法化学法破碎细胞

一、分离纯化根据蛋白质溶解度、分子大小及形状、电离性质、生物学功能的差异进行：根据溶解度根据分子量透析和超滤平衡离心凝胶过滤层析蛋白质混合物的分离方法

一、分离纯化、根据电荷毛细管电泳离子交换层析

、根据蛋白质的亲和能力亲和层析

一、分离纯化缓冲液盐、金属离子和螯合剂还原剂去垢剂蛋白酶抑制剂01表面效应蛋白质的环境因素温度02储存单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了演示发布的良好效果，请言简意赅地阐述您的观点。03蛋白质分离纯化的条件

二、分析鉴定Western印迹技术基本操作步骤：蛋白样品的制备SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质的电转移蛋白质与抗体的结合反应目标蛋白质的显示单击此处添加小标题01western印迹基本步骤图示单击此处添加小标题02

Western免疫印迹用于测定特定蛋白质的大小和含量?基本原理将经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白组分从凝胶转移至固相支持体上，以针对特定蛋白质的抗体作为探针，与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位进行特异性反应，结合上的抗体可用二抗检测。常用的二抗是与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联的抗免疫球蛋白或A蛋白；实际应用中常常还需要设置适当的对照。

常需要内参蛋白量化蛋白量；GAPDH、ACTIN、ALBUMIN……

?特点将SDS的高分辨能力与抗原抗体反应的特异性、敏感性相结合(灵敏度达到ng级)蛋白电泳在变性条件下进行，消除了蛋白溶解、聚集以及与外来蛋白共沉淀等问题

免疫荧光法(immunofluorescence)主要用于检测目的蛋白在细胞内的定位。?基本原理将待检的目的蛋白作为抗原，固定在载玻片上，先加上针对目的蛋白的抗体(第一抗体)进行反应，再加上针对第一抗体的荧光素标记抗体(第二抗体)进行反应，称作间接免疫荧光法。如果将荧光素标记在第一抗体上，则不用再加第二抗体，称作直接免疫荧光法。?特点?需要在荧光显微镜下观察结果；?无法检测目的蛋白的大小；?操作简便，但需设立必要的对照；

免疫荧光法(immunofluorescence)例1例2

免疫沉淀(immunoprecipitation)技术为方便后续分析，在免疫沉淀前，常会对抗原进行标记。01?将抗体加入蛋白混合溶液，使之与相应抗原结合；?加入固定的抗体结合蛋白(如:ProteinA-琼脂糖珠)；?经离心后，与ProteinA结合的抗原-抗体复合物便可沉淀；?将样品变性后即可获得游离的抗原蛋白；?基本步骤02利用一种可离心沉淀的抗体结合蛋白(如ProteinA,ProteinG等)，将抗原-抗体复合物从蛋白混合溶液中分离，进行定量或定性研究。?基本原理

免疫共沉淀(co-IP)技术基于与蛋白质X的生理性相互作用，如果用蛋白X的抗体免疫沉淀X，则蛋白质Y也可能沉淀下来。Y的这种免疫沉淀被称为免疫共沉淀(co-immunocipitation,Co-IP)，此法最常用于测定两种目标蛋白质在体内的结合。YABY裂解细胞免疫