临床免疫学检验课件 第13章 细胞免疫学技术学习资料.pptVIP

第十三章免疫细胞功能检测技术对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等功能测定可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。第一节淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定淋巴细胞T细胞（负责细胞免疫功能）B细胞（执行体液免疫功能）NK（非特异性免疫作用）一、T细胞功能的检测T细胞增殖试验T细胞分泌功能测定T细胞介导的细胞毒试验体内试验（一）T淋巴细胞增殖试验1.原理：2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：PHA------T细胞ConA-------T细胞PWM-------T、B细胞LPS-------B细胞特异性刺激物：异种抗原同种组织抗原3.检测方法（1）形态学检查法方法学评价：优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。（2）3H-TdR掺入法优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。（三）T细胞介导的细胞毒试验1.原理：2.方法形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞同位素法：淋巴细胞（CTL）+含51Cr的肿瘤细胞肿瘤细胞破坏51Cr释放测定γ射线(四)体内试验特异性抗原皮肤试验PHA皮肤试验二、B细胞功能检测B细胞增殖能力的试验溶血空斑试验B细胞抗体形成功能的检测体内试验(一)B细胞增殖能力的试验抗IgM细菌脂多糖SAC的SPA (二)溶血空斑试验1.原理：2.方法学：经典溶血空斑形成试验被动溶血空斑试验3．临床应用与评价溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。(三)B细胞抗体形成功能的检测

——酶联免疫斑点法1.原理：2．应用与方法学评价：该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。优点：稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。(四)体内试验体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。三、NK细胞活性测定第二节吞噬细胞功能检测技术吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。一、中性粒细胞功能检测技术二、巨噬细胞功能检测技术吞噬细胞的功能：趋化吞噬胞内杀灭作用一、中性粒细胞功能的检测细胞趋化功能的检测吞噬和杀菌功能的检测(一)细胞运动功能——趋化功能检测1.原理：2.方法学：琼脂糖平板法(二)吞噬和杀菌功能测定1．显微镜检查法：2.溶菌法3．NBT还原试验二、巨噬细胞功能检测(一)炭粒廓清试验(二)吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定1．酸性磷酸酶的测定硝酸铅法偶氮法2．非特异性酯酶的测定常用α-萘醋酸法(四)细胞毒作用测定用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。(五)巨噬细胞促凝血活性测定激活的巨噬细胞可产生一种